【摘 要】
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目的本课题旨在研究RelB在肝纤维化进展中的作用,并且通过探寻RelB调控的下游炎症因子,进一步明确RelB促进肝纤维化发生发展的分子机制。方法1.应用Cre/loxP系统获取肝细胞特异性RelB基因敲除的小鼠(RelBΔhep),通过Genotyping和Western blot技术验证RelBΔhep小鼠构建成功。2.通过CCl4腹腔注射构建小鼠肝纤维化模型,比较RelBΔhep小鼠和野生型（
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目的本课题旨在研究RelB在肝纤维化进展中的作用,并且通过探寻RelB调控的下游炎症因子,进一步明确RelB促进肝纤维化发生发展的分子机制。方法1.应用Cre/loxP系统获取肝细胞特异性RelB基因敲除的小鼠(RelBΔhep),通过Genotyping和Western blot技术验证RelBΔhep小鼠构建成功。2.通过CCl4腹腔注射构建小鼠肝纤维化模型,比较RelBΔhep小鼠和野生型（WT）小鼠表型差异。3.在RelBΔhep小鼠和WT小鼠肝纤维化模型中,对小鼠肝脏组织进行H＆E、Sirius Red以及Masson染色,观察小鼠肝脏组织结构和肝纤维化程度差异。进行免疫组织化学染色,观察肝纤维化标志物的表达差异。4.通过CCl4诱导体外肝细胞损伤模型,应用Western blot和qRT-PCR实验检测NF-κB家族成员RelA、RelB和c-Rel的表达情况,并利用免疫荧光染色观察RelB核易位情况,并且检测炎性细胞因子和促纤维化因子的表达情况。5.在SMMC-7721细胞系中,转染RelB siRNA,并利用CCl4诱导体外肝细胞损伤模型,检测下调RelB后对炎性细胞因子表达的影响。结果1.在CCl4诱导的体内小鼠肝纤维化模型中,通过H＆E、Sirius Red以及Masson染色,发现RelBΔhep小鼠的肝脏组织结构和肝纤维化程度相比WT小鼠显著减轻。2.通过对肝纤维化标志物α-SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ进行免疫组织化学染色,发现RelBΔhep小鼠肝纤维化标志物的表达明显低于WT小鼠。3.在CCl4诱导的体外肝细胞损伤模型中,发现RelB的表达相较于RelA和c-Rel显著升高。免疫荧光结果显示,CCl4刺激细胞后RelB核易位增加。并且,在CCl4诱导的WT小鼠中,Western blot结果显示,CCl4诱导的WT小鼠RelB含量相比对照小鼠显著增加。4.在CCl4诱导的体外肝细胞损伤模型中,下调RelB后对炎性细胞因子的表达无明显变化,而对照组细胞中炎性细胞因子显著升高。结论1.RelBΔhep小鼠能够减少肝细胞损伤和肝纤维化。2.RelBΔhep小鼠能够减少肝脏内的HSCs活化以及ECM沉积。3.RelB在肝细胞损伤时表达上调、核易位增加。4.RelB能够调控肝细胞损伤时炎性细胞因子的产生。
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