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原核表达病毒病原dsRNA的抗病毒策略与植物抗病毒基因工程相比更加安全、便捷,且比体外合成dsRNA省时省力。百合受百合斑驳病毒(Lily mottle virus,LMoV)侵染严重,目前防治措施还是以传统脱毒和化学处理为主,作为单子叶植物很难利用当前转基因技术得到抗性百合。本研究首次利用原核表达系统得到了源于LMoV外壳蛋白(CP)和柱状内含体蛋白(CI)基因的dsRNA,并证明此方法在抗百合斑驳病毒上的可行性。本研究分别选取LMo V CP和CI的基因热点序列,通过OZ-LIC(One-step,zero-background ligation-independent cloning)法将目的基因的正反片段分别插入到植物表达载体pRNAi-LIC内含子的两侧,成功构建了含有CI-517 bp,CI-295 bp和CP-400 bp三种发卡结构的RNAi载体。借助农杆菌渗入法介导的瞬时表达系统在烟草上进行抗病毒分析,RT-PCR和间接ELISA结果显示源于CI-517 bp和CI-295 bp的反向重复片段转录出的发卡RNA(hpRNA)对入侵病毒有较好的干扰作用,而CP-400 bp发卡结构的抗病效果不显著,说明构建的发卡结构可以引发RNAi。再将三种发卡结构与pSP73原核表达载体连接构建dsRNA表达载体,转化大肠杆菌RNase III缺陷株M-Jm109lacY诱导dsRNA的表达。通过高压细胞破碎法得到dsRNA的粗制品,喷洒百合进行抗病性验证,Real-time PCR和RT-PCR结果表明CI517-dsRNA和CI295-dsRNA均可以保护百合不发病或延缓发病。在整个生长周期dsRNA处理组均有不发病株存在,即使表现症状的百合其LMoV积累量也要比对照组低。说明源于LMoV的dsRNA对百合具有很好的保护作用。