土贝母皂苷乙对A549细胞影响的实验研究

来源 :陕西中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zengyufeng
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目的:本次实验通过土贝母皂苷乙对人肺癌A549细胞株的抑制作用,初步探讨土贝母皂苷乙对其抑制作用的机理,为进一步研究该化合物抗肿瘤的分子机制、作用靶点及临床研究奠定基础。  方法:  (1)在细胞培养箱中培养A549细胞,用倒置显微镜观察A549细胞的形态,台盼蓝染色观察其活力。  (2)MTT法检测不同浓度的土贝母皂苷乙处理A549细胞24h及48h的生长抑制作用,确定24h和48h半数抑制的药物浓度。以土贝母皂苷乙作用于宫颈癌细胞(Hela细胞)为对照。  (3)用Hoechst33342和碘化丙啶染料对土贝母皂苷乙处理后的细胞进行染色,荧光显微镜观察细胞的形态。  (4)用DNA琼脂糖凝胶电泳方法分析该药物处理A549细胞后的DNA电泳条带。  (5)用流式细胞仪检测土贝母皂苷乙对细胞凋亡率的影响。  结果: MTT结果表明,土贝母皂苷乙对A549细胞及Hela细胞都有细胞毒性,都能抑制细胞的增殖,但是同等浓度的土贝母皂苷乙作用于A549细胞比作用于Hela细胞的抑制作用更强,土贝母皂苷乙诱导A549细胞凋亡的能力比后者强。土贝母皂苷乙作用A549细胞24小时的IC50为13.37μg/ml,48小时的IC50为10.99μg/ml,与对照组比较存在显著性差异,有统计学意义。说明土贝母皂苷乙对A549细胞的生长有抑制作用,并且呈时间和剂量依赖性。荧光显微镜观察到对照组细胞的细胞核比较完整,分布均匀,经土贝母皂苷乙处理的细胞核皱缩、染色体聚集,核破裂形成小体,凋亡现象较明显,初步可判断这一典型的调亡特征是通过土贝母皂苷乙诱导产生的。DNA琼脂糖凝胶电泳结果显示:对照组中细胞的DNA完整,低浓度的土贝母皂苷乙处理细胞,DNA无明显的断裂,而高浓度处理后DNA明显断裂,在200bp~700bp之间,呈梯型电泳条带,更进一步证实了土贝母皂苷乙能使A549细胞的DNA片段化,也就是说能诱导其凋亡。FCM分析结果显示用浓度为5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml的土贝母皂苷乙处理A549细胞24小时后,随浓度的升高,凋亡率依次升高,早期的凋亡率分别为3.57%,11.16%,15.48%,20.87%,23.59%,坏死率分别为2.88%,10.31%,11.44%,12.45%,13.28%,可以看出低浓度时早期凋亡率与坏死率差别不明显,当浓度增大时早期凋亡率明显高于坏死率,说明土贝母皂苷乙可以诱导A549细胞早期凋亡,且与浓度有一定的依赖关系。  结论:土贝母皂苷乙对人肺腺癌A549细胞有抑制作用,其24小时IC50为13.37μg/ml,在一定浓度下呈剂量及时间依赖性。土贝母皂苷乙能诱导人肺腺癌A549细胞早期凋亡,且与浓度有一定的依赖关系。
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