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[背景与目的]乳腺癌发病率逐年增高,机制仍欠清晰。木犀草素可抑制多种肿瘤的发生、进展,乳腺癌中报道少。抑癌基因失活是肿瘤发生重要机制,采用药物逆转是肿瘤防治重要策略。OPCML抑癌基因甲基化失活可致肿瘤发生、进展。本研究旨在探讨木犀草素对乳腺癌发生、发展的影响,对其中OPCML抑癌基因表达的影响,并探讨其在细胞增殖、侵袭中的作用机制。[方法]1.体外培养乳腺癌细胞系BT474,用不同浓度木犀草素孵育后,采用CCK-8、划痕及Transwell小室实验观察木犀草素对BT474细胞的增殖、迁移、侵袭能力的影响;建立裸鼠异种移植瘤模型,观察不同浓度木犀草素对移植瘤生长的影响。2.木犀草素处理BT474细胞或移植瘤裸鼠,实时定量PCR和Western blot分别检测不同浓度木犀草素对BT474细胞及裸鼠异种移植瘤中OPCML mRNA和蛋白表达影响;采用siRNAOPCML转染BT474细胞,观察siRNA干扰前后能否影响木犀草素对BT474细胞的生长抑制作用;构建OPCML表达载体并转染BT474细胞,观察其能否影响细胞的生长增殖。3采用甲基化特异性PCR法检测木犀草素处理前后OPCML启动子区域甲基化水平,同时测定木犀草素处理前后细胞内甲基化及转录因子Sp1活性;qPCR、Western blot检测木犀草素对DNMT1 mRNA及蛋白表达的影响;转染使BT474细胞过表达Sp1,观察其对木犀草素处理后OPCML表达、启动子甲基化以及DNMT1 mRNA表达的影响;通过流式细胞术检测BT474细胞的凋亡情况以及细胞周期的变化,凋亡相关分子r-H2AX磷酸化情况,Caspase-8的活化以及cPARP的水平。[结果](1)采用不同浓度木犀草素处理BT474细胞后,可显著抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭与迁移,呈一定的浓度与时间依赖性;同时,木犀草素也可抑制裸鼠皮下肿瘤的形成和生长。(2)木犀草素可上调乳腺癌细胞中、乳腺癌异种移植瘤中OPCML mRNA及蛋白的表达;siRNA沉默OPCML后可减弱木犀草素对BT474细胞增殖、侵袭与迁移的抑制作用;此外,细胞内OPCML过表达可抑制细胞增殖、侵袭、迁移;(3)木犀草素可抑制OPCML启动子区域DNA甲基化;并能下调细胞内以及移植瘤中甲基化活性;木犀草素能下调细胞内以及移植瘤中DNMT1 mRNA及蛋白的表达,木犀草素能下调细胞内SP1的活性;过表达Sp1,木犀草素对DNMT1的抑制作用、对DNA甲基化的抑制作用、对OPCML表达的诱导作用都减弱;木犀草素可诱导BT474细胞凋亡;诱导BT474细胞r-H2A磷酸化,促caspase-8活化,上调细胞内cPARP水平。[结论]:木犀草素可通过抑制OPCML基因的启动子区域的甲基化并上调其表达水平,从而诱导乳腺癌细胞周期阻滞和凋亡,抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭。