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植物线虫病害是一种全球性难以防治的土传性病害,其引起的直接经济损失逐年增加。由于化学杀线剂对环境的危害日益明显,植物寄生线虫的生物防治受到人们越来越多的重视。线虫卵寄生真菌厚垣孢普克尼亚菌(Pochonia chlamydosporia YMF1.00613,PC)、捕食线虫真菌少孢节丛孢(Arthrobotrys oligospora YMF 1.3170,AO)以及其三株具有强烈杀线虫活性的突变菌株(35)AOL_s00215g281,(35)AOL_s00215g282,(35)AOL_s00215g283(AO281,AO282和AO283)、虫生真菌青霉(Penicillium YMF 1.00864,PE)和嗜热真菌嗜热杜邦菌(Thermomyces dupontii YM3-4,TD)是重要的线虫病原真菌。单一生防菌株的田间防效易受到环境因素(温度、土壤酸碱度和养分等)影响,导致防效降低。本论文通过盆栽实验,研究了嗜热杜邦菌(TD)分别与厚垣孢普克尼亚菌(PC),少孢节丛孢(AO)和三株突变株(AO281,AO282和AO283)及虫生真菌青霉(PE)联合使用对根结线虫的防治效果,结果如下:由于嗜热杜邦菌(TD)最适生长温度为45?C,因此先将TD进行堆肥处理。结果显示TD能显著抑制根结线虫对宿主植物的侵染,其抑制率达24.32%。TD分别与6株常温真菌PC、PE、AO、AO281、AO282及AO283的联合使用,结果显示6株常温真菌均能够促进植物根的生长和降低线虫引起的根结数量,从防治效果来看,AO283>PC>PE>AO282>AO>AO281>对照组;从促进植物生长效果上看,PC>AO283>AO281>AO282=AO=PE>对照组,这表明在TD处理过的土壤中添加其它线虫病原真菌,比单一使用TD菌株对线虫的防治效果更好,且PC和AO283联合TD使用效果最佳。此外,对TD堆肥15 d和30 d的土壤进行理化性质的检测,发现TD有效提高土壤中全磷、全钾、三种速效元素(钾、镁和钠)的含量(增加了37.78%-193.75%),土壤肥力的提高对小白菜生物量有明显的促进作用,TD堆肥15 d和30 d种植的小白菜地上部分鲜重比对照分别增加72%和122%。综上来看,TD既能够改良土壤肥力,又能够降低根结线虫对植物的侵染率,同时能够与多株常温真菌混合使用来防治线虫,特别是PC和AO283联合TD使用时防治效果更好。少孢节丛孢通过产生特殊的捕器-三维菌网捕杀线虫,本实验也初步探讨了少孢节丛孢中2个P450基因AOL_s00075g118和AOL_s00078g25对真菌的三维菌网形成,捕食线虫能力和代谢产物的影响。结果如下:突变株ΔAOL_s00075g118菌丝生长速率上与野生型无明显差异,突变株ΔAOL_s00078g25显著快于野生菌株,并且两株敲除菌株的孢子产量均显著多于野生菌株,ΔAOL_s00075g118和ΔAOL_s00078g25产孢量比野生菌株分别增加65.62%和47.32%。ΔAOL_s00075g118孢子萌发速率快于野生菌株,2 h和4 h的孢子萌发率比野生菌株分别提高29.29%和17.22%;而ΔAOL_s00078g25孢子萌发速率始终慢于野生菌株,2 h和4 h的孢子萌发率仅为野生菌株的53.45%和66.67%。在捕器产量和捕食线虫能力上,ΔAOL_s00075g118和ΔAOL_s00078g25的捕器产生数目和杀线虫能力均低于野生菌株,在24 h时,ΔAOL_s00075g118的捕器产生数量比野生菌株减少43.67%,线虫死亡率仅为野生菌株的58.14%;ΔAOL_s00078g25捕器产生数量比野生菌株降低25.33%,线虫死亡率比野生菌株降低13.58%。HPLC代谢图谱结果显示,敲除菌株ΔAOL_s00075g118和ΔAOL_s00078g25对少孢节丛孢的次级代谢产物均产生显著的影响,与野生菌株相比,ΔAOL_s00075g118增加了14个峰,减少了9个峰;ΔAOL_s00078g25增加了12个峰,减少了8个峰。GC-MS图谱显示,突变株ΔAOL_s00075g118增加了3-methyl-2-Butenal;2,6-dimethyl-2-Octanol和N,N,N’-trimethyl-N’-(4-piperidyl)-Ethylenediamine这3个特有化合物;野生菌株有3个特有化合物。ΔAOL_s00078g25增加了4个特有化合物,分别为4-hydroxy-4-methyl-2-Pentanone;L-Homocitrulline;Benzaldehyde和1-Octen-3-ol;野生菌株有2个特有化合物。总体而言,基因AOL_s00075g118和AOL_s00078g25的敲除均导致突变菌株孢子产量增加,但三维菌网产量减少,捕食线虫能力减弱,表明两个P450基因均影响了少孢节丛孢的生长发育以及捕食线虫能力的调控。