大豆肽是大豆蛋白经水解得到的低分子肽混合物,具有比大豆蛋白更优越的理化特性和生理功能,在食品、医药和饲料添加剂中具有广泛的应用前景。微生物发酵是制备大豆肽的方法之一,由于其将蛋白酶的发酵生产和大豆肽的酶解生产有机地结合在一起,降低了大豆肽的生产成本,同时克服了酶水解法制备大豆肽产品的苦味大和口感差等缺点。目前利用微生物发酵法生产大豆肽被认为是一种较先进和有效的方法,应用前景较好。本论文以工业副产物豆粕为原料,利用微生物混合发酵技术来制备大豆肽,以期获得具有肽营养和益生特性的饲料添加剂。本试验通过筛选产蛋白酶活性较高的芽孢杆菌,在体外研究其益生特性,并与米曲霉进行配伍筛选能混合发酵豆粕制备大豆肽的菌株组合,利用正交试验和响应面分析法分别对混菌发酵条件和发酵培养基进行优化,为大豆肽的工业扩大生产提供了参考。结果如下:(1)产蛋白酶芽孢杆菌的筛选:试验以蛋白酶活力和水解度为指标,结合液体发酵和固体发酵工艺考察菌株的发酵能力,从而筛选优良的豆粕发酵菌株。结果表明,通过初筛和复筛获得3株能较好发酵豆粕的芽孢杆菌CS16、CS21、CS27,为后续研究奠定了基础。(2)芽孢杆菌益生特性的体外研究:模拟胃肠道环境,研究3株芽孢杆菌的耐受存活情况,同时对肠道中致病性金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肠炎沙门氏菌拮抗特性、产酶特性和急性毒性安全性试验进行研究。表明在4h内,人工胃液中存活率在15%～50%之间,胆盐和人工肠液中存活率在50%以上;对病原菌抑菌圈直径在10mm以上;具有较好的蛋白酶和淀粉酶活性;急性毒性试验LD50>20g/kgBW,表明这3株芽孢杆菌可以作为饲用微生态制剂的候选菌种。(3)混菌发酵豆粕菌株的筛选及鉴定:利用平板混合培养和实际发酵相结合的方法筛选发酵豆粕的最佳菌株组合,并对筛选的芽孢杆菌进行鉴定。结果获得能和米曲霉配伍的芽孢杆菌CS27,经鉴定CS27为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。(4)混菌发酵制备大豆肽的发酵工艺研究:利用正交试验和响应面分析法分别对混菌发酵条件和发酵培养基进行优化,结果表明在豆粕中添加5%的麸皮,料水比为1:1.149、MgSO4 0.048%、糖蜜0.294%培养基条件下,芽孢菌与米曲霉同时接种,接种比例为2:1,30℃下发酵48h,大豆肽含量为21.74%,比未经发酵处理豆粕中大豆肽含量(3.54%)提高了5.1倍,为豆粕发酵工艺扩大提供了参考。