【摘 要】
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目的:脑胶质瘤是严重威胁人类生存的神经系统疾病之一,具有高发病率和高度恶性,目前的治疗方法效果不理想,且易复发。近年来,基因治疗逐渐被认识及广泛研究,但具体靶点及作用
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目的:脑胶质瘤是严重威胁人类生存的神经系统疾病之一,具有高发病率和高度恶性,目前的治疗方法效果不理想,且易复发。近年来,基因治疗逐渐被认识及广泛研究,但具体靶点及作用机制尚无定论。本研究探讨了 siRNA靶向沉默FOXC1基因调控Notch通路对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡能力的影响。方法:根据前期实验,选择靶向沉默FOXC1基因效率最高的siRNA序列(FOXC1-siRNA-1707)和 阴 性 对 照 序 列(FOXC1-siRNA-NC),用Lipofectamine2000 DNA转染试剂分别转染两种人类脑胶质瘤细胞(U251细胞和TJ905细胞)。MTT法检测转染6h、12h、24h和48h等不同时间后两种人脑胶质瘤细胞增殖能力的变化。流式细胞术检测靶向沉默FOXC1基因后脑胶质瘤细胞的凋亡率(以亚凋亡峰值表示)。蛋白质印迹法检测沉默FOXC1基因后Notch-1和DLL4蛋白表达水平的变化。结果:MTT分析表明,在脑胶质瘤U251细胞中,实验组(FOXC1-siRNA-1707组)细胞增殖率与对照组、阴性对照组(FOXC1-siRNA-NC组)相比降低,且具有时间依赖性,差异均有统计学意义(F处理组=80169.78,F时间=11503 1.3,F处理组×时间)=5604.137,P均<0.05);与对照组相比,阴性对照组(FOXC1-siRNA-NC组)细胞增殖率降低,但差异没有统计学意义(P>0.05)。同样,在脑胶质瘤TJ905细胞中,实验组(FOXC1-siRNA-1707组)细胞增殖率与对照组、阴性对照组(FOXC1-siRNA-NC组)相比降低,且具有时间依赖性,差异均有统计学意义(F 处理组=111037.1,F 时间=153277.7,F处理组×时间=5208.2256,P 均<0.05);与对照组相比,阴性对照组(FOXC1-siRNA-NC组)细胞增殖率降低,但差异没有统计学意义(P>0.05)。流式细胞仪检测结果表明,在U251细胞中,FOXC1基因沉默后,脑胶质瘤细胞凋亡率增加,差异有统计学意义(F=155.9,P<0.01);在TJ905细胞中,FOXC1基因沉默后,脑胶质瘤细胞凋亡率增加,差异有统计学意义(F=243.1,P<0.01)。蛋白质印迹法结果显示,在U251细胞中,靶向沉默FOXC1基因后,Notch 1和DLL4蛋白的表达水平下降,差异有统计学意义(F值分别为7.408、12.305,P均<0.05);在TJ905细胞中,靶向沉默FOXC1基因后,Notch 1和DLL4蛋白的表达水平亦下降,差异有统计学意义(F值分别为8.742、19.204,P均<0.05)。结论:沉默FOXC1基因可以抑制脑胶质瘤细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与调控Notch通路相关。
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