第一部分胰岛靶向下调Extl3表达后1型糖尿病的发生发展趋势目的 1型糖尿病（T1DM）作为一种慢性疾病,其特征是由于胰岛β细胞破坏导致胰岛素缺乏,最终导致血糖水平升高。因此各种原因导致的胰岛β细胞破坏可加重T1DM进展。Extl3属于EXT家族成员,主要参与HS链的合成及作为Reg蛋白的受体发挥作用。研究表明Extl3与多种神经、免疫、骨骼、肿瘤等组织的疾病相关。在胰腺中,Extl3也发挥着重要的作用。有研究报道,Extl3在胰岛中表达,胰岛中缺失Extl3可导致异常的胰岛形态、β细胞功能紊乱及血糖异常。但在T1DM中,Extl3的表达及影响尚不明确。因此本研究旨在探讨Extl3在1型糖尿病发生发展过程中的作用、对胰岛形态及胰岛素分泌的影响并探讨相关机制。方法 动物水平上,通过干扰T1DM小鼠胰岛Extl3表达,研究Extl3的敲降对小鼠代谢表型、胰岛形态及胰岛素分泌的影响并探讨相关机制。将C57BL/6J雌性小鼠随机分为,Con-sh RNA+STZ组和Extl3-sh RNA+STZ组。两组小鼠首先分别进行胰腺导管原位注射相应的AAV8干扰病毒后观察三周,每周监测体重、空腹血糖。术后三周后两组均进行STZ（40mg/kg）腹腔注射造模,每天一次,连续五天。每周监测体重及空腹血糖值,第六周处死,留取空腹血。酶联免疫吸附法测定小鼠血清胰岛素水平;苏木素-伊红染色法观察小鼠胰腺组织的病理变化并计数胰岛数量及胰岛数目;通过免疫组化、免疫荧光等检测小鼠胰腺组织Extl3的表达。结果 1.在正常胰腺中,Extl3在胰腺内分泌部的胰岛中表达。2.在胰腺导管原位注射手术、STZ造模后,两组小鼠的体重均出现一个短暂的下降过程,两组间均无明显差异。3.造模6周后,观察到两组小鼠空腹血糖均明显升高。与Con-sh RNA+STZ组相比,Extl3-sh RNA+STZ组小鼠空腹血糖较高（13.10±4.732 vs.21.40±1.389 mmol/L,P=0.0435）,实验组小鼠血清中胰岛素浓度降低（0.482±0.109 vs.0.300±0.019 ng/m L,P=0.039）。4.HE染色及胰岛计数结果提示两组胰岛数目、胰岛面积无明显统计学差异。结论 动物水平上发现,敲降胰岛β细胞内Extl3表达可诱导血糖的升高,胰岛素水平的降低,促进T1DM发生发展。本研究希望为阐明T1DM的发病机制及防治提供思路。第二部分Extl3对胰岛β细胞功能的影响及机制研究目的 本研究首先在动物模型中观察到了下调胰岛内Extl3后T1DM小鼠空腹血糖的升高、血清空腹胰岛素的降低。在胰岛中主要是β细胞分泌胰岛素,发挥降糖作用。本研究在小鼠胰岛β细胞系MIN6细胞上,验证Extl3对胰岛β细胞分泌胰岛素功能的影响。方法 RNA水平及蛋白水平验证Extl3-si RNA的干扰效应;利用si-RNA技术转染MIN6细胞降低细胞内Extl3表达,培养48h,检测两组MIN6细胞GSIS功能。构建过表达Extl3质粒,在RNA水平及蛋白水平验证过表达Extl3质粒效应;过表达质粒转染MIN6细胞提高细胞内Extl3表达,36h后收细胞功能,检测两组MIN6细胞GSIS功能。结果 1.RNA水平及蛋白水平提示si RNA转染后MIN6细胞内Extl3表达降低,GSIS实验结果显示,与对照组相比,抑制Extl3表达可使MIN6细胞高糖刺激下胰岛素分泌能力受损（2.445±0.625 vs.1.398±0.205,P=0.0030）。2.RNA水平及蛋白水平提示过表达Extl3后MIN6细胞内Extl3表达升高,GSIS实验结果显示,与对照组相比,增强Extl3表达后MIN6细胞功能无明显变化。结论 胰岛β细胞Extl3水平降低可使高糖刺激胰岛β细胞释放胰岛素能力受损,而过表达Extl3后,高糖刺激胰岛β细胞释放胰岛素能力无明显影响。