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目的：
在细胞水平上探讨miR-128是否通过PTEN/PI3K/Akt信号通路调控DJ-1蛋白的表达，进而影响Ishikawa子宫内膜癌细胞的增殖、细胞周期、凋亡、侵袭迁移等生物学功能。
方法：
1.利用RealtimeRT-PCR技术分别检测正常子宫内膜组织、子宫内膜癌组织、正常子宫内膜细胞系ESC以及子宫内膜癌细胞系Ishikawa中miR-128、PTENmRNA、DJ-1mRNA表达情况；同时，利用Westernblot技术分别检测上述组织和细胞系中DJ-1、PTEN、磷酸化Akt(p-Akt)的蛋白表达水平；此外，利用统计学方法初步分析子宫内膜癌组织和细胞系中miR-128表达与DJ-1及PTEN表达的相关性。
2.miR-128mimics和miR-128inhibitor分别转染Ishikawa细胞，并设立相应的阴性对照，转染48h后，通过RealtimeRT-PCR检测miR-128表达水平的变化，Westernblot检测DJ-1、PTEN、p-Akt蛋白表达水平的变化，以求明确调控Ishikawa细胞内miR-128表达水平是否影响PTEN/PI3K/Akt通路及DJ-1的表达。
3.将PTENsiRNA转染或与miR-128inhibitor共转染Ishikawa细胞，并设立相应的对照组，转染48h后，通过RealtimeRT-PCR检测miR-128表达水平的变化，WesternBlot检测PTEN、p-Akt、DJ-1蛋白表达水平的变化，以求观察Ishikawa细胞内PTEN沉默是否影响miR-128、p-Akt、DJ-1的表达。同时旨在观察Ishikawa细胞内miR-128抑制对p-Akt及DJ-1表达所产生的影响是否被PTEN沉默所逆转。
4.Ishikawa细胞用PI3K/Akt通路抑制剂LY294002预处理24h，或Ishikawa细胞经miR-128mimics转染48h后再用LY294002预处理24h，随后，通过RealtimeRT-PCR检测miR-128表达水平的变化，WesternBlot检测PTEN、p-Akt、DJ-1蛋白表达水平的变化，旨在观察Ishikawa细胞内PI3K/Akt通路抑制是否影响miR-128、PTEN及DJ-1的表达；同时，观察Ishikawa细胞内miR-128上调对PTEN、p-Akt及DJ-1表达所产生的影响是否被LY294002所逆转，从而进一步明确Ishikawa细胞内miR-128、PTEN/PI3K/Akt通路及DJ-1之间上下游关系。
5.将miR-128mimics转染Ishikawa细胞，同时结合LY294002或DJ-1siRNA干预，通过对以下指标的检测，明确miR-128经PTEN/PI3K/Akt信号通路调控DJ-1蛋白表达后，是否进一步影响Ishikawa子宫内膜癌细胞生物学功能：①CCK-8实验及细胞克隆实验检测细胞增殖的变化；②流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡情况的变化；③细胞划痕实验检测细胞迁移能力的变化；④Transwell实验检测细胞侵袭能力的变化。
结果：
1.与正常子宫内膜组织相比较，子宫内膜癌组织中miR-128、DJ-1mRNA及蛋白、p-Akt蛋白的表达水平均显著增加，而PTENmRNA及蛋白表达水平明显下降；同样，与ESC正常子宫内膜细胞系相比，Ishikawa子宫内膜癌细胞系中miR-128、DJ-1mRNA及蛋白、p-Akt蛋白的表达也均明显上调，而PTENmRNA及蛋白表达显著下调。有趣的是，通过相关性统计分析发现，子宫内膜癌组织和细胞系中miR-128表达与PTEN表达呈负相关，而与DJ-1表达呈正相关。
2.miR-128mimics转染Ishikawa细胞后，miR-128表达上调，同时伴随PTEN蛋白表达下调，p-Akt及DJ-1蛋白表达上调；相反，miR-128inhibitor转染Ishikawa细胞后，miR-128表达下调，同时伴随PTEN蛋白表达增加，p-Akt及DJ-1蛋白表达下降。
3.PTENsiRNA转染Ishikawa细胞后，PTEN蛋白表达显著下调，而miR-128表达无明显变化，但p-Akt及DJ-1蛋白表达显著上调；此外，miR-128inhibitor转染上调PTEN蛋白表达及下调p-Akt和DJ-1蛋白的效应均可被PTENsiRNA所抑制，但miR-128inhibitor转染下调miR-128表达的效应不受PTENsiRNA影响。
4.LY294002预处理Ishikawa细胞后，p-Akt及DJ-1蛋白表达显著下调，但miR-128及PTEN表达水平无明显变化；此外，miR-128mimics转染上调p-Akt和DJ-1蛋白的效应均可被LY294002所抑制，但miR-128mimics转染上调miR-128表达及下调PTEN蛋白表达的效应均不受LY294002影响。
5.miR-128mimics转染Ishikawa细胞后，可使细胞增殖和克隆形成能力明显增强，同时促使细胞由G期向S期转化，并显著降低细胞凋亡率，增强细胞迁移、侵袭能力。重要的是，miR-128mimics所产生的上述效应可分别被LY294002和DJ-1siRNA所抑制。
结论：
在子宫内膜癌细胞中，miR-128可通过激活PTEN-PI3K/Akt信号通路，上调DJ-1的表达，进而参与调控细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡、侵袭和迁移等细胞生物学行为。
在细胞水平上探讨miR-128是否通过PTEN/PI3K/Akt信号通路调控DJ-1蛋白的表达，进而影响Ishikawa子宫内膜癌细胞的增殖、细胞周期、凋亡、侵袭迁移等生物学功能。
方法：
1.利用RealtimeRT-PCR技术分别检测正常子宫内膜组织、子宫内膜癌组织、正常子宫内膜细胞系ESC以及子宫内膜癌细胞系Ishikawa中miR-128、PTENmRNA、DJ-1mRNA表达情况；同时，利用Westernblot技术分别检测上述组织和细胞系中DJ-1、PTEN、磷酸化Akt(p-Akt)的蛋白表达水平；此外，利用统计学方法初步分析子宫内膜癌组织和细胞系中miR-128表达与DJ-1及PTEN表达的相关性。
2.miR-128mimics和miR-128inhibitor分别转染Ishikawa细胞，并设立相应的阴性对照，转染48h后，通过RealtimeRT-PCR检测miR-128表达水平的变化，Westernblot检测DJ-1、PTEN、p-Akt蛋白表达水平的变化，以求明确调控Ishikawa细胞内miR-128表达水平是否影响PTEN/PI3K/Akt通路及DJ-1的表达。
3.将PTENsiRNA转染或与miR-128inhibitor共转染Ishikawa细胞，并设立相应的对照组，转染48h后，通过RealtimeRT-PCR检测miR-128表达水平的变化，WesternBlot检测PTEN、p-Akt、DJ-1蛋白表达水平的变化，以求观察Ishikawa细胞内PTEN沉默是否影响miR-128、p-Akt、DJ-1的表达。同时旨在观察Ishikawa细胞内miR-128抑制对p-Akt及DJ-1表达所产生的影响是否被PTEN沉默所逆转。
4.Ishikawa细胞用PI3K/Akt通路抑制剂LY294002预处理24h，或Ishikawa细胞经miR-128mimics转染48h后再用LY294002预处理24h，随后，通过RealtimeRT-PCR检测miR-128表达水平的变化，WesternBlot检测PTEN、p-Akt、DJ-1蛋白表达水平的变化，旨在观察Ishikawa细胞内PI3K/Akt通路抑制是否影响miR-128、PTEN及DJ-1的表达；同时，观察Ishikawa细胞内miR-128上调对PTEN、p-Akt及DJ-1表达所产生的影响是否被LY294002所逆转，从而进一步明确Ishikawa细胞内miR-128、PTEN/PI3K/Akt通路及DJ-1之间上下游关系。
5.将miR-128mimics转染Ishikawa细胞，同时结合LY294002或DJ-1siRNA干预，通过对以下指标的检测，明确miR-128经PTEN/PI3K/Akt信号通路调控DJ-1蛋白表达后，是否进一步影响Ishikawa子宫内膜癌细胞生物学功能：①CCK-8实验及细胞克隆实验检测细胞增殖的变化；②流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡情况的变化；③细胞划痕实验检测细胞迁移能力的变化；④Transwell实验检测细胞侵袭能力的变化。
结果：
1.与正常子宫内膜组织相比较，子宫内膜癌组织中miR-128、DJ-1mRNA及蛋白、p-Akt蛋白的表达水平均显著增加，而PTENmRNA及蛋白表达水平明显下降；同样，与ESC正常子宫内膜细胞系相比，Ishikawa子宫内膜癌细胞系中miR-128、DJ-1mRNA及蛋白、p-Akt蛋白的表达也均明显上调，而PTENmRNA及蛋白表达显著下调。有趣的是，通过相关性统计分析发现，子宫内膜癌组织和细胞系中miR-128表达与PTEN表达呈负相关，而与DJ-1表达呈正相关。
2.miR-128mimics转染Ishikawa细胞后，miR-128表达上调，同时伴随PTEN蛋白表达下调，p-Akt及DJ-1蛋白表达上调；相反，miR-128inhibitor转染Ishikawa细胞后，miR-128表达下调，同时伴随PTEN蛋白表达增加，p-Akt及DJ-1蛋白表达下降。
3.PTENsiRNA转染Ishikawa细胞后，PTEN蛋白表达显著下调，而miR-128表达无明显变化，但p-Akt及DJ-1蛋白表达显著上调；此外，miR-128inhibitor转染上调PTEN蛋白表达及下调p-Akt和DJ-1蛋白的效应均可被PTENsiRNA所抑制，但miR-128inhibitor转染下调miR-128表达的效应不受PTENsiRNA影响。
4.LY294002预处理Ishikawa细胞后，p-Akt及DJ-1蛋白表达显著下调，但miR-128及PTEN表达水平无明显变化；此外，miR-128mimics转染上调p-Akt和DJ-1蛋白的效应均可被LY294002所抑制，但miR-128mimics转染上调miR-128表达及下调PTEN蛋白表达的效应均不受LY294002影响。
5.miR-128mimics转染Ishikawa细胞后，可使细胞增殖和克隆形成能力明显增强，同时促使细胞由G期向S期转化，并显著降低细胞凋亡率，增强细胞迁移、侵袭能力。重要的是，miR-128mimics所产生的上述效应可分别被LY294002和DJ-1siRNA所抑制。
结论：
在子宫内膜癌细胞中，miR-128可通过激活PTEN-PI3K/Akt信号通路，上调DJ-1的表达，进而参与调控细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡、侵袭和迁移等细胞生物学行为。