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猪瘟(classical swine fever,CSF)被世界动物卫生组织(OIE)列为必须上报的动物烈性传染病之一,临床上以高热稽留、高死亡率、免疫抑制和繁殖障碍为主要特征。CSF的病原是猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)。CSFV是黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pestivirus)成员,该属还包括牛病毒性腹泻病病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)、绵羊边界病病毒(border disease virus,BDV)等成员。CSFV的结构蛋白包括囊膜糖蛋白Erns、E1、E2和衣壳蛋白C。E2是CSFV重要的毒力因子和主要的保护性抗原,同时在病毒的吸附和侵入过程中发挥重要作用。但迄今为止有关E2蛋白与宿主细胞相互作用的研究很少。本研究利用猪巨噬细胞cDNA酵母表达文库和酵母双杂交技术筛选与E2蛋白存在相互作用的宿主蛋白,获得了17种与E2可能存在相互作用的宿主蛋白,经比较分析后选择硫氧还蛋白2(thioredoxin 2,Trx2)进行深入研究。Trx2广泛表达于猪的不同组织中。经酵母共转化验证、GST pull-down试验和原位邻位连接试验(in situ proximity ligation assay,PLA)证明,Trx2蛋白和CSFV E2蛋白存在直接的相互作用。激光共聚焦试验证明,E2蛋白与Trx2蛋白共定位于胞浆。通过Trx2蛋白的三种截短突变体与E2蛋白的GST pull-down试验结果表明,Trx2蛋白的硫氧还结构域是其与E2蛋白相互作用的关键区域。为研究Trx2蛋白对CSFV复制的调控作用,我们设计并合成特异性靶向Trx2蛋白的干扰性小RNA分子,通过RNA干扰下调PK-15细胞内源性Trx2蛋白的表达,结果表明,沉默Trx2蛋白可显著促进CSFV的增殖和基因组的复制;将CSFV感染慢病毒介导的稳定表达Trx2蛋白的PK-15细胞系,结果显示,过表达Trx2蛋白后会显著抑制CSFV的增殖和基因组的复制。在CSFV感染后不同时间点利用Western blotting检测细胞内Trx2蛋白的表达情况,发现CSFV感染的PK-15细胞中Trx2蛋白表达量明显低于对照组;用E2和Trx2表达质粒共转染HEK293T细胞,结果显示,Trx2蛋白的表达量随E2蛋白表达量的增加而减少,这表明,CSFV感染能抑制Trx2蛋白的表达。总之,本研究确定了Trx2蛋白与E2蛋白的相互作用及其关键区域,证实了Trx2蛋白对CSFV复制的抑制作用,有助于增进我们对CSFV感染机制的理解。