研究背景肝癌（Hepatocarcinoma）是我国常见的恶性肿瘤之一,具有发病隐匿、进展迅速、预后差的临床特点。2015年我国恶性肿瘤流行病学调查结果显示,肝癌发病率在我国所有恶性肿瘤中居于第4位,死亡率居于第2位,严重威胁着人民的生命健康。肝癌的主要发病危险因素包括乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）、酒精性脂肪肝、长期摄入黄曲霉素等,其中HBV感染是我国肝癌患者最常见的发病因素。手术切除仍然是目前肝癌的主要治疗方法,但术后高复发转移率严重影响着肝癌患者的生存预后。越来越多的研究报道表明,HBV不仅与肝癌的发病密切相关,与肝癌治疗后的复发转移也有十分重要的联系。因此,积极探索肝癌中与HBV相关的致病因子具有十分重要的意义。CCDC65是卷曲螺旋蛋白家族成员之一,编码精子尾部蛋白,是连接蛋白—动力蛋白调节复合物的重要成分,对纤毛运动至关重要。已有文献报道CCDC65基因的突变会导致原发性纤毛运动障碍。目前CCDC65基因在肿瘤中作用的相关研究十分少见。本次研究拟通过数据库和肝癌组织芯片探索CCDC65在肝癌中的差异表达情况及与生存预后的关系,并进一步分析CCDC65在HBV相关性肝癌中的作用和相关的分子机制。研究结果1.通过公共数据库平台探索TCGA数据库中已有的肝癌数据,对比371例肝癌样本和50例正常样本中CCDC65 mRNA表达水平,发现肝癌中CCDC65水平明显增高;进一步检测多株肝癌细胞及正常肝细胞发现在HBV阳性肝癌细胞中CCDC65表达水平明显增高;2.通过数据库探索CCDC65对肝癌生存预后的影响,发现高表达CCDC65的HBV 阳性肝癌患者远期生存率较低;结合免疫组织化学染色检测肝癌组织芯片中癌组织与癌旁组织CCDC65的表达情况,发现HBV 阳性肝癌组织中胞浆定位的CCDC65表达量明显增高;3.通过MTT、EdU实验检测干扰CCDC65对HBV阳性肝癌细胞增殖能力的影响,结果表明干扰CCDC65后HBV 阳性肝癌细胞的增殖能力明显受到抑制;4.利用生物信息学对CCDC65的理化性质、亚细胞定位、各级结构进行分析预测。进一步通过RT-qPCR和WB实验验证表明干扰CCDC65通过抑制PI3K/AKT信号通路抑制肝癌细胞增殖能力;COIP实验表明CCDC65与PI3K/AKT通路调节蛋白PTEN相互作用并调节PTEN的表达量水平;5.利用RT-qPCR、WB实验检测发现在HBV 阳性肝癌细胞中干扰CCDC65后,HBV关键癌蛋白HBx的表达水平下降。研究结论HBV相关性肝癌中CCDC65胞浆表达量明显高于癌旁组织,且与患者预后不良有关。干扰CCDC65一方面通过结合PTEN抑制PI3K/AKT信号通路抑制肝癌细胞增殖能力,另一方面通过下调HBV关键癌蛋白HBx表达量调控HBV相关性肝癌发生发展。