兔骨骼肌肌球蛋白浊度、溶解度及热诱导凝胶强度研究

来源 :南京农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:missiyoumiss
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本论文包括三方面内容:(1)从兔腰大肌(Pasoas major,PM)和半膜肌(Semimembranosus proprius,SMp)提取、纯化并鉴定肌球蛋白。(2)蛋白质浓度、加热温度、pH值、离子强度、多聚磷酸盐、金属离子等因素对兔PM和SMp肌球蛋白的浊度和溶解度的影响。(3)蛋白质浓度、pH值、离子强度、加热温度、加热方式、多聚磷酸盐、金属离子、非肉蛋白、亲水胶体、转谷氨酰胺酶(TGase)等因素对肌球蛋白热诱导凝胶强度的影响。 第一章:从体重2~2.5Kg的3月龄公兔的PM和SMp中提取分离了肌球蛋白,提取纯化的肌球蛋白浓度为20~30mg/mL,提取率为1%,在SDS-PAGE图谱上出现四条带,最上端一条为肌球蛋白重链,SDS—PAGE分析证实其相对分子量为205KDa,下面为三条轻链,SDS—PAGE分析证实其相对分子量分别为25.9KDa、17.8KDa和13.8KDa。 第二章:以肌球蛋白溶液在340nm的吸光度作为浊度的评价指标,利用离心后蛋白质浓度的变化作为溶解度的指标,研究了各因素对兔PM和SMp肌球蛋白浊度及溶解度的影响。结果显示,肌球蛋白浓度对浊度的影响是线性的。温度升高肌球蛋白溶液浊度上升,PM肌球蛋白溶液在55℃,SMp肌球蛋白溶液在60℃其浊度达到最大值,而温度升高肌球蛋白溶解度下降。PM和SMp肌球蛋白在离子强度为0.6M KCl溶液中pH为5.5时肌球蛋白溶液浊度最大,肌球蛋白溶解度在pH值大于5时显著上升。离子强度下降肌球蛋白溶液的浊度会上升而溶解度下降。在高离子强度下(0.6MKCl)焦磷酸钠(SPP)、三聚磷酸钠(TPP)会使肌球蛋白溶液浊度下降,溶解度上升,而六偏磷酸钠(HMP)则相反。在低离子强度下(0.2M KC),低浓度(0.25%)的SPP会使肌球蛋白溶液浊度上升,高浓度(如0.75%)会使肌球蛋白溶液浊度下降;TPP使浊度下降,低浓度的TPP(0.25%)使溶解度上升,高浓度的TPP(0.75%)使溶解度下降,而HMP在低浓度下(PM 0.25%,SMp 0.5%)会使浊度下降,高浓度HMP(0.75%)会使肌球蛋白溶液浊度上升,在HMP浓度为0.75%时使肌球蛋白溶解度显著升高。CaCl2和MgCl2会使肌球蛋白溶液浊度升高,CaCl2使肌球蛋白溶解度升高和MgCl2会使肌球蛋白溶解度下降。综上所述,加工条件(如蛋白质浓度、pH、离0强度和温度)及添加物(如多聚磷酸盐、金属离子)等对肌球蛋白溶液的浊度、溶解度有显著的影响。肌球蛋白理化性质是其凝胶性质的基础,因此就要进一步研究它的凝胶性质。 第三章:研究了各种因素对肌球蛋白热诱导凝胶强度(简称凝胶强度)的影响。结果表明,肌球蛋白浓度对凝胶强度的影响是线性的;在0.6M KCl的离子强度下PM和SMp肌球蛋白形成凝胶的的最佳pH分别为6.0和5.5;在pH 6.0的缓冲溶液中,凝胶强度随离子强度的升高而升高,形成凝胶的最佳离子强度PM和SMP肌球蛋白分别为1.OM肛1和0.6M皿I;刚肌球蛋白只有在加热时间为m分钟时线性升温形成的凝胶比恒温加热的强度大,而加热方式对SMP肌球蛋白凝胶强度没有显著影响;PM和 s帅肌球蛋白在加热温度为 eo co时形成的凝胶强度最大;在肌球蛋白溶液中加入SPP和TPP会使凝胶强度下降,加入HMP会使凝胶强度上升;PM和SMP肌球蛋白分别加入 10InM和 12all的 Mp’”,SInM和 10InM的 Ca’“会使肌球蛋白凝胶强度显著增加bm0.05);低浓度的海藻酸钠对PM肌球蛋白凝胶强度没有显著影响(PMO.05),高浓度的海藻酸钠会显著提高PM肌球蛋白凝胶强度加 M 0.05),黄原胶对PM肌球蛋白凝胶强度有提高作用b.05人海藻酸钠对会使S帅肌球蛋白凝胶强度显著降低hM0.05人黄原胶会使SMP肌球蛋白凝胶强度显著升高b.05地但高浓度的黄原胶不如低浓度的提高作用大;非肉蛋白的加入会使肌球蛋白的凝胶强度下降,而加入TGase后在一定程度上减弱非肉蛋白对肌球蛋白凝胶强度的降低作用;TGase也对单独的肌球蛋白凝胶强度有提高作用。综上所述,加工条件如蛋白质浓度、pH、离子强度、加热温度,加热方式等)及添加物办多聚磷酸盐、金属离子、非肉蛋白、亲水胶体和TGase)等对肌球蛋白溶液的热诱导凝胶强度有显著的影响。
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