大蒜细胞溶质中超氧化物歧化酶的分离纯化

来源 :西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:toelfdd
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
大蒜含有丰富的超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD),超氧化物歧化酶具有清除超氧自由基(O2-·)功能,有效地预防O2-·对机体的毒害作用。本研究采用热变性、聚乙二醇6000(PEG)沉淀作用、DEAE-纤维素柱层析三种方法对大蒜细胞溶质中的超氧化物歧化酶进行了分离纯化;利用改良的连苯三酚自氧化法测定了酶活力,同时研究了酶对温度、pH的稳定性;并对酶的类型、在紫外光区的吸收光谱等性质进行了研究。研究结果如下: 1.大蒜细胞溶质中超氧化物歧化酶粗酶液中存在一种干扰酶活性发挥的物质,该物质对热不稳定,而大蒜细胞溶质中超氧化物歧化酶对热较稳定,利用超氧化物歧化酶、干扰物质、杂蛋白的热稳定差异,用热变性法进行初步分离。实验表明在60℃20min进行热变性,钝化了抑制酶活性发挥的干扰物质,并使酶液中总蛋白浓度从24mg/mL下降到15.8mg/mL,得到比活为15.9U/mg的粗酶。 2.聚乙二醇6000(PEG)是一种水溶性非离子聚合物,可使蛋白质发生沉淀作用,并且其对被沉淀的蛋白质有较好的选择性;当溶液中PEG的浓度为16%~26%,上清液中超氧化物歧化酶活力保持不变;当PEG浓度提高至28%时,上清液中酶活力开始下降,至PEG浓度为40%时,上清液中酶活力为零,表明酶液中超氧化物歧化酶从溶液中完全析出,得到了比活为129.3U/mg的酶蛋白。 3.PEG沉淀后的酶蛋白经DEAE-纤维素(DE-52)柱层析,利用pH7.8 0.05mol/L磷酸缓冲液(PB)+1.0mol/L NaCl梯度洗脱,使超氧化物歧化酶蛋白和杂蛋白有效地分开。层析最佳的条件是:流速为1.2mL/min、柱高比为1:10、进样量为6mL;超氧化物歧化酶被完全被洗脱的时间为33min,洗脱体积为40mL,杂蛋白被洗脱下来洗脱时间为66min,体积为80mL,表明DEAE-纤维素(DE-52)柱层析具有较高的柱效和分辨率,得到了比活为3145.5U/mg超氧化物歧化酶蛋白。 4.大蒜细胞溶质中超氧化物歧化酶是一种对热和酸碱度稳定性较好的酶,低于60℃酶活力较为稳定,60℃30min酶活力仅损失19.1%;高于70℃酶活力损失明显,70℃30min酶活力损失56.6%,80℃30min酶活力损失70.8%;pH4~9范围内酶活力保持稳定,pH<4和pH>9时,超氧化物歧化酶活力下降明显,pH2.0时剩余酶活力为21%,pH10时,剩余酶活力49.1%,pH=12时,酶活力完全损失。 5.大蒜细胞溶质中超氧化物歧化酶对H2O2和氰化物敏感,经鉴定酶的类型是Cu·Zn-SOD;在紫外光区的最大吸收峰是258nm,表明其是含有酪氨酸和色氨酸较少的一类酶蛋白。 6.经过三步分离纯化,从500g大蒜中得到15.6mg产品,比活为3145.5U/mg,纯化倍数为197.8,回收率39.2%。
其他文献
随着企业经营活动的多样化及外部经营环境的复杂化,通货膨胀和金融创新等因素不断冲击着净利润的主导地位,基于历史成本原则、配比原则和实现原则的净利润越来越无法满足会计信
腐蚀是造成气井井下油管失效最重要的原因之一,造成油管腐蚀的介质有CO2、H2S和SRB细菌,其中CO2是最普遍也是造成腐蚀损伤最严重的介质。采取各种防腐措施可以降低油管腐蚀速
目前,在哈尔滨市及很多大中城市民间流传着一种称之为“西藏灵菇”的发酵乳制品,据传说它来源于西藏的一个小村子,对人具有多种生物学功能。在健康意识的驱动下该物作为保健食品
【正】 国世平同志的《再论社会主义条件下价值规律的第二个作用》(《中央财政金融学院学报》)1984年第4期。以下简称《再论》)启发我进一步去学习、思考马克思主义的劳动价
目的探讨宫腔镜下子宫黏膜下肌瘤切除不同治疗模式的治疗效果。方法回顾性分析2014年3月至2015年12月因子宫黏膜下肌瘤在海南省农垦三亚医院就诊的患者160例,其中日间手术组8
细菌纤维素(Bacterial cellulose,简称BC)是由生长在液态含糖基质中的细菌产生的,并分泌到基质中的纤维素成分,它不是细菌细胞壁的结构成分,而是一种胞外产物。与植物纤维比较,细菌
甲壳素是一种丰富的自然资源,是地球上仅次于纤维素的第二大丰 富可更新有机资源。壳聚糖是甲壳素经脱乙酰化处理的产物。在甲壳素/ 壳聚糖大分子中
汉字作为世界上最古老的文字之一,是汉文化的载体,是本土文化的视觉符号之一。然而在中国现代平面设计中,拉丁文的运用比汉字还要广泛,中国的平面设计师不仅在设计方法上学习
在企业内部,人事档案是人才信息的载体,是企业想要获得人才的主要依据。随着人事制度的改革和人才流动的加速,流动人员人事档案在管理过程中存在各种各样的问题。在档案管理
番茄是含有丰富营养成分的健康食品。把番茄加工成脱水番茄是一种有前途的新型番茄制品。本课题主要对影响脱水番茄品质的几个关键环节一预处理、护色、干燥、复水等进行初步