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蝉花是一种历史悠久的药食用真菌,含有多糖、虫草酸、核苷类、甾醇类以及多肽类等生物活性物质。随着自然环境的变化,天然蝉花资源稀缺,因此通过人工进行蝉花培育成为科研工作的一个热点。本文从分析蝉花子实体的微生物群落结构入手,找出其中的关键菌株,再对关键菌株进行分离以选育出发酵性状优良的菌株,进而开展纯种的发酵培养研究,通过添加蚕蛹粉的发酵模拟培养出与子实体成分接近的虫菌复合物。论文的主要工作如下:(1)采用高通量测序技术,分析了不同产地、不同部位以及不同发育阶段的野生蝉花子实体的微生物群落结构。Isaria cicadae在不同产地的蝉花子实体真菌群落中处于优势地位,其中OTU6782为优势OTU,而蝉花细菌群落的结构由于产地不同而发生明显变化。Isaria cicadae在蝉花子实体不同部位(表面泥土、孢梗束、菌皮、带泥菌皮以及菌核)的真菌群落中均处于优势地位,其中OTU6782相对丰度最高。在蝉花子实体发育过程中,Isaria cicadae迅速占据真菌群落优势地位,且该物种具有丰富的种内多样性,其中OTU6782为优势OTU,此外OTU12109,OTU13152,OTU486,OTU2297,OTU11491,OTU246,OTU58,OTU2950,OTU8787,OTU73,OTU130等细菌与Isaria cicadae在蝉花发育过程中共同存在。(2)从蝉花子实体中分离了Isaria cicadae 8196、82542、81957和TZC-3菌株,对其进行了ITS和18S rRNA基因序列分析,并通过液态发酵培养筛选出发酵性能较为优良的菌株。分子学及形态学鉴定表明,8196、82542、81957和TZC-3菌株的ITS rRNA基因序列与Isaria cicadae相似性在99%以上,与野生蝉花真菌OTU6782序列相似性最高达到99.65%。对4株菌分别进行液态培养,发现不同菌株在生物量、胞内外多糖含量、胞内外核苷含量存在一定的差异,其中TZC-3菌株在生物量、胞内多糖总量以及腺苷的产量和产率上都呈现明显的优势,因而选择该菌株用于后续实验研究。(3)考察了蝉蛹粉对Isaria cicadae TZC-3发酵过程的影响,分析了蝉蛹粉强化发酵蝉花菌丝体的成分组成。结果表明,蝉蛹粉的添加可在一定程度上促进蝉花菌丝体中胞内多糖、腺苷和N6-(2-羟乙基)-腺苷(HEA)的合成,其中添加4%蝉蛹粉发酵的强化菌丝体质量较高,胞内多糖产率为14.55 mg/g,胞内多糖产量为74.78 mg/100 mL;腺苷产率为1.22 mg/g,产量为6.66 mg/100 mL;HEA产率为1.58 mg/g,产量为8.63mg/100 mL。与对照组菌丝体和蝉蛹粉相比,强化菌丝体的成分(一般成分、水解氨基酸、游离氨基酸、水解单糖、脂肪酸)与野生蝉花子实体更加接近,其中部分游离氨基酸(天冬氨酸、丝氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸和脯氨酸)和水解后的单糖(阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖和木糖)含量提高最为明显。