七氟醚麻醉对发育期神经系统损害的行为学观察和甲基化调控研究

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目的:许多研究表明哺乳动物在发育关键期接受全身麻醉药作用,会对发育期神经系统和成年后认知能力产生不良影响,但对其作用机制尚无定论。表观遗传学甲基化调控在神经系统发育,学习记忆等过程中均有重要作用。七氟醚是目前临床小儿麻醉最常用的全麻药之一,本文通过观察出生后8天SD大鼠接受七氟醚麻醉后,成年期学习记忆能力改变和在不同时间点的杏仁核,海马,皮层等各脑区DNA甲基转移酶的变化,探索七氟醚麻醉对发育期神经系统可能的表观遗传学调节机制。   方法:取出生后8天SD大鼠幼仔,雌雄随机,体重约20g左右,给予3%七氟醚复合70%氧气麻醉4h;对照组在相同环境下暴露于空气4h后返回原饲养笼中。行为学实验只选择两组中雄性成年大鼠,于出生后8周进行开场实验,高架十字迷宫实验,Morris水迷宫实验,场景性恐惧记忆实验检测其学习记忆能力,每项实验用鼠每组8-14只。分子实验部分雌雄大鼠随机,分别于麻醉结束后即刻,麻醉结束后2h,24h,1天,7天,28天,56天各时间点分离杏仁核,海马,皮层各脑组织,进行实时荧光定量PCR反应分析DNMT1,DNMT3a, NR1, NR2B, BDNF, Reelin各基因的mRNA表达水平,每组用鼠4-7只。另取两组各7只大鼠,于麻醉结束后和暴露空气结束后于开胸直视下左心室取动脉血进行血气分析检测七氟醚麻醉对动物血氧,血糖水平的影响。   结果:新生期接受七氟醚麻醉大鼠,成年后主要表现为海马依赖的空间类型整合能力和场景性恐惧记忆受损。DNA甲基转移酶(DNMT)变化也主要集中在海马,表现为DNMT1在麻醉结束即刻显著性降低,后恢复至与对照组相近水平;DNMT3a在麻醉后2h内呈先升高后降低的双向变化。NR2B基因表达水平在麻醉后24h显著性升高;BDNF基因表达水平麻醉后2h,24h均显著性降低。血气分析结果显示,4h七氟醚麻醉对大鼠血氧含量,通气状况和血糖水平没有显著性影响。   结论:实验结果表明,新生大鼠接受七氟醚麻醉,可主要对成年后海马依赖的空间整合,恐惧记忆能力造成损伤,而其它脑区的相关功能则无明显改变;与行为学实验结果一致,DNMT1,3a和相关基因改变也主要集中在海马区,提示七氟醚麻醉对脑功能的损伤是以海马为主的。而且DNA甲基化调节参与了七氟醚引起发育期神经系统损伤的作用,引起了海马部位一些学习记忆相关基因的表达异常改变,关键期这些变化可能是成年后海马功能障碍的基础。这也可能是研究全麻药发育期神经系统毒性作用的一个新的方向。
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