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用提纯的兔出血症病毒（RHDV）—RH-84分离株的病毒子和大肠杆菌表达的两种VP60重组融合蛋白作为免疫原，免疫BALB/C小鼠，取免疫脾细胞与SP2/O融合，制备杂交瘤细胞。以RHDV作为检测原，用间接ELISA方法检测，采取有限稀释法亚克隆3次，初步筛选出10株针对RHDV的阳性杂交瘤细胞株，其中由pET5a-RHDV-VP60重组蛋白免疫制备的有3株：5/C4、6/F10、D/3，由pGEX-6P-RHDV-VP60重组蛋白免疫制备的有2株：5/B11、3/B5，由纯化的完整病毒粒子免疫制备的有5株：RH-1、RH-2、16D6-1、16D6-2、16F2。经过4次亚克隆，发现由纯化的完整病毒粒子免疫制备的5株单克隆抗体ELISA阳性值高、性质稳定，均为IgG（n），而由VP60重组蛋白制备的5株单抗ELISA阳性值不高，且多为IgM，考虑到实际应用的意义，对这5株杂交瘤细胞液氮冻存，留待以后继续研究，故只对由纯化的完整病毒粒子免疫制备的5株特异性单抗进行了以下研究。 通过HI试验，鉴定RH-1、RH-2有较高的血凝抑制能力（7log2、8Log2），16D6-1、16D6-2、16F2血凝抑制能力则较弱（2log2、3log2）。经Western-blot分析，这5株单抗除RH-1外，其他4株RH-2、16D6-1、16D6-2、16F2均和非热变性RHDV VP60反应，5株单抗均能识别热变性RHDV多肽条带。又通过DOT-ELISA和TAS-ELISA试验，结果表明5株单抗均是针对兔出血症病毒粒子的特异性单克隆抗体，而不与其他抗原（兔肝组织、新城疫病毒及禽流感病毒）发生反应。以上研究结果为5株单抗的广泛应用奠定了坚实的理论基础。 兔出血症病毒衣壳蛋白VP60基因通过两种克隆表达载体pET5a和pGEX-6P-1已经分别在大肠杆菌中表达出来。SDS-PAGE电泳鉴定，pET5a-RHDV-VP60/JM109（DE3）和pGEX-6P-RHDV-VP60/BL21两种重组菌经IPTG诱导，分别表达出了87kd和62kd、以包涵体形式存在的不溶性融合蛋白。为了鉴定两种表达产物pET5a-RHDV-VP60重组蛋白（62kd）和pGEX-6P-RHDV-VP60重组蛋白（87kd）的免疫生物活性，通过Western-blot分析，结果pET5a-RHDV-VP60重组蛋白能被针对完整病毒粒子的特异性单克隆抗体RH-1、16D6-1和16F2这3株识别，pGEX-6P-RHDV-VP60重组蛋白能被单抗16F2识别；表明两种表达产物具有RHDV的抗原性。 本研究又用两种表达产物分别免疫小鼠，以RHDV完整病毒子作为检测原对制备的多抗血清进行间接ELISA和HI检测；结果两种重组蛋白的鼠多抗血清ELISA反应均为阳性（P/N＞2.1），OD490平均值分别为0.50、0.33，且血凝抑制价分别为4Log2、3Log2；进一步表明VP60基因的大肠杆菌表达产物具有原病毒的抗原性和免疫原性，能诱发小鼠产生针对RHDV的免疫反应。我们又借助于兔抗RHDV自然感染多抗血清与2种重组蛋白进行Western-blot分析，结果两种重组蛋白均被兔抗RHDV多抗血清识别。以上扬州大学硕卜学位论文试验结果表明，RHDV衣壳蛋白VP60基因的大肠杆菌表达产物一pET5a一RHDV一Vp60重组蛋白（62kd）和pGEX一6p一RHoV一vP6o重组蛋白（s7kd）具备RHDv的免疫生物学特性，且pET5a一阴Dv一vP6o重组蛋白比pGEx一6P一RHDV一vP60重组蛋白的特性强。这些结果向我们展示了RHDv基因工程苗的广阔应用前景。