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目的应用钙调蛋白激酶Ⅱ（calmodulin kinase Ⅱ,Ca MK Ⅱ）抑制剂KN-62和三磷酸肌醇激动剂尿苷三磷酸（uridine triphosphate,UTP）作用于人肝星状细胞（Hepatic Stellate Cell,HSC）,观察HSC凋亡情况,旨在从内质网应激途径（Endoplasmic Reticulum Stress,ERS）探讨Ca MK Ⅱ对HSC凋亡的作用机制,为寻找治疗肝纤维化（Hepatic Fibrosis,HF）的新靶点提供科学依据。方法复苏液氮罐中的HSC,把生长良好的细胞均分为5组:空白对照组、转化生长因子β1（Transforming growth factor beta-1,TGF-β1）组、KN-62组、UTP组、KN-62+UTP组。空白对照组加无血清培养基培养24 h,TGF-β1组加入5 ng/m L TGF-β1培养24 h,其他三组在5 ng/m L TGF-β1培养24 h之后,弃去培养基,KN-62组更换10μmol/L KN-62作用6 h,UTP组更换3.2 mmol/L UTP作用24 h,KN-62+UTP组先用10μmol/L KN-62处理6 h,弃去瓶内培养基,更换3.2 mmol/L UTP作用24h。HSC经分组处理后:CCK-8法测细胞增殖,倒置显微镜观测HSC形态,流式细胞术测HSC周期,ELISA法测HSC Ca MK Ⅱ活性,采用一步法TUNEL实验、Annexin V-FITC&PI双染法测HSC凋亡情况,激光共聚焦显微镜扫描Fluo-3负载的细胞内Ca2+浓度,实时定量PCR法测Ca MK Ⅱ m RNA水平,Western Blot检测Ca MK Ⅱ蛋白、ERS蛋白GRP78、凋亡调控蛋白（Caspase-12、Caspase-3、Bcl-2、Bax）的表达。结果1 HSC形态变化:空白对照组形态为不规则星状紧密相连;TGF-β1组细胞间隙增宽,呈长梭形改变,向扁平状肌成纤维样细胞转变,少许仍呈星状;KN-62组、UTP组、KN-62+UTP组细胞密度和体积均变小,出现凋亡细胞,且KN-62+UTP组HSC的凋亡严重。2 HSC增殖:每组间HSC的相对增殖率（relative growth rate,RGR）比较均有显著性差异（P<0.05）,加入TGF-β1后,其RGR较空白对照组显著升高,KN-62组、UTP组、KN-62+UTP组RGR与TGF-β1组比较均显著降低（P<0.05）,KN-62+UTP组RGR最低（P<0.05）。3周期分布:各组细胞周期的分布差异存在显著性（P<0.05）,TGF-β1组较空白对照组G1期和G2期降低,S期升高（P<0.05）;加入KN-62,较TGF-β1组细胞周期分布,S期继续升高（P<0.05）,而给予UTP后G1期升高,S期降低（P<0.05）。4 Ca MK Ⅱ活性变化:各组Ca MK Ⅱ活性比较有显著性差异（P<0.05）,加入TGF-β1,Ca MK Ⅱ活性明显高于空白对照组（P<0.05）;与TGF-β1组Ca MK Ⅱ活性比较,KN-62组明显降低（P<0.05）,UTP组明显升高（P<0.05）,KN-62+UTP组Ca MK Ⅱ活性高于KN-62组,低于UTP组（P<0.05）。5 TUNEL示:各组别间凋亡率均有明显差异（P<0.05）,空白对照组（19.00±4.52）%较TGF-β1组（17.90±4.45）%无明显差别（P>0.05）;与TGF-β1组相比,KN-62组、UTP组、KN-62+UTP组凋亡率[（35.42±3.78）%、（40.07±2.88）%、（68.27±2.66）%]均明显升高（P<0.05）;KN-62+UTP组凋亡率明显高于KN-62组、UTP组（P<0.05）。6 Annexin V-FITC&PI双染显示:各细胞组别间凋亡率差异均有统计学意义（P<0.05）,空白对照组（3.47±0.40）%相比TGF-β1组（2.52±0.48）%无显著性差异（P>0.05）;KN-62组、UTP、KN-62+UTP组凋亡率[（14.20±1.31）%、（13.77±1.57）%（32.40±2.42）%]均高于TGF-β1组;KN-62+UTP组凋亡率明显高于KN-62组、UTP组（P<0.05）。7 HSC内Ca2+:各细胞组Ca2+浓度相比较差异明显（P<0.05）。空白对照组与TGF-β1组Ca2+浓度差异不显著（P>0.05）;KN-62组、UTP组、KN-62+UTP组Ca2+浓度明显高于TGF-β1组,且KN-62+UTP组HSC内Ca2+浓度高于KN-62组、UTP组（P<0.05）。8 Ca MK Ⅱ的m RNA、蛋白表达:各组的表达水平存在显著差别（P<0.05）,与空白对照组相比,TGF-β1组m RNA、蛋白水平升高（P<0.05）;较TGF-β1组结果,KN-62组的m RNA、蛋白水平降低（P<0.05）,UTP组结果明显升高（P<0.05）,KN-62+UTP组则无明显差异（P>0.05）;KN-62+UTP组Ca MK Ⅱ水平介于KN-62组与UTP组之间,组间具有差异（P<0.05）。9 Western Blot显示:细胞组别间各蛋白表达均差异显著（P<0.05）,空白对照组与TGF-β1组中各蛋白表达比较差异不明显（P>0.05）,TGF-β1组的各蛋白表达（除外Bcl-2）和Bax/Bcl-2比值低于另外3组,KN-62+UTP组GRP78、caspase-12、caspase-3和Bax/Bcl-2比值的水平均较KN-62组、UTP组有显著升高（P<0.05）。结论1抑制Ca MK Ⅱ可使HSC内Ca2+稳态失衡。2诱导Ca2+稳态失衡可抑制HSC增殖,促进其凋亡。3 Ca2+/Ca MK Ⅱ信号通路可能调控ERS凋亡途径诱导HSC凋亡。图13幅;表14个;参149篇。