目的:通过对手术切除慢传输型便秘患者乙状结肠及正常乙状结肠组织蛋白酶D及S-100蛋白进行免疫组化检测,观察慢传输型便秘乙状结肠组织内神经丛数量和神经丛内神经节细胞形态学改变及数量变化以及神经纤维改变,探寻慢传输型便秘患者的肠神经系统病理学改变,指导临床治疗。方法:1标本取材1.1对照组选取既往无便秘及其他结肠病史的结直肠癌手术标本乙状结肠段20例作为正常对照组,其中男性8例,女性12例,年龄范围29–76岁,中位年龄63岁,标本取材距肿瘤边缘5cm以外正常肠壁区域;1.2实验组便秘诊断符合功能性便秘罗马Ⅲ标准,术前经结肠运输实验证实存在乙状结肠慢传输异常,排除其他其他结肠器质性病变病,手术切除结肠标本取乙状结肠段20例为研究组,其中男性6例,女性14例,患者年龄范围32-71岁,中位年龄59岁。2实验方法手术切除标本后立即取材,取乙状结肠全层肠壁,生理盐水反复冲洗干净,选取合适部位修剪成2*2cm大小,中性福尔马林液固定24小时,捞出固定好的标本,梯度酒精脱水,二甲苯透明,石蜡包埋,手动切片机切片,厚度4um,切片脱蜡,水化,3%过氧化氢孵育,血清封闭,分别滴加一抗(CAD和S-100),滴加二抗,DAB显色,苏木素反蓝,梯度酒精脱水,中性树胶封片;在光学显微镜下观察肠壁粘膜下层和肌间神经丛,神经丛内神经节细胞数量、形态,神经纤维形态,每张切片粘膜下层和肌间分别随机选取5个不重叠低倍(100×)视野,分别计数粘膜下层和肌间CAD染色及S-100染色神经丛个数,再转至高倍(400×)镜下计数神经丛内神经节细胞个数,采集典型图像。3数据分析数据采用“均数±标准差”(x±s)表示,应用统计学软件SPSS19.0对数据进行统计学分析,采用独立样本T检验,检验水准α=0.05。结果:1 CAD染色:对照组乙状结肠粘膜下层和肌间可见神经丛分布,神经节细胞呈现深棕色染色,大小均匀,实验组乙状结肠肌间和粘膜下可见神经丛分布,神经节细胞呈现深棕色染色,神经节细胞大小、分布不均匀,神经丛面积、神经节细胞数量减少。2 S-100染色:对照组乙状结肠粘膜下层和肌间神经丛可见神经丛,呈棕黄色染色,神经丛中可见细胞状“空白区”,即神经节细胞,大小、分布规整,神经纤维走形规则,无扭曲;实验组乙状结肠粘膜下层和肌间神经丛可见神经丛,神经丛面积减小,神经丛内细胞状“空白区”较对照组减少,大小、分布不规整,神经纤维分布杂乱、增生、扭曲。3 CAD染色结果分析:与对照组比较,试验组乙状结肠粘膜下层和肌间神经节细胞数量显著减少,差异有统计学意义(P<0.05),神经丛数量两组比较无统计学意义(P>0.05)。4 S-100染色结果分析:与对照组比较,试验组乙状结肠粘膜下层和肌间神经节细胞数量显著减少,差异有统计学意义(P<0.05),神经丛数量两组比较无统计学意义(P>0.05)。结论:1 CAD和S-100作为肠神经系统的神经节细胞和神经纤维特异性标记物,应用免疫组化方法可以反映出结肠内神经系统概况。2慢传输型便秘患者较正常乙状结肠内肌间神经丛及粘膜下神经丛的数量无明显改变,神经丛面积减小,神经丛内神经节细胞数量减少,神经纤维增生、紊乱等病理改变。