手足口病主要流行于婴幼儿群体,引起患者发热、口腔溃疡以及手脚出现皮疹。肠道病毒EV71是手足口病的主要病原体之一,与其他病原体相比,它还会引发神经系统并发症。目前并没有特效的抗EV71病毒药物。2A蛋白酶、3C蛋白酶是病毒自身编码的两个半胱氨酸蛋白酶,基于相同的酶切机制,但在病毒的生命周期中发挥不同的功能。2Apro切割病毒前体蛋白VP1-2A之间的位点,其余均由3Cpro负责。除此之外,它们在病毒复制、劫持宿主蛋白翻译、抑制天然免疫机制等过程中扮演着十分关键但又不同的角色,因此被看做抗病毒药物设计的切入口。基于片段的药物设计是发现新颖先导化合物的有效方法之一,我们以EV713C蛋白酶晶体为基础对片段库进行筛选。在第一轮片段库筛选中,发现片段953、片段2139疑似结合在3C蛋白酶的RNA结合区域与活性口袋(S1’),并通过一维核磁实验验证相互作用。通过连接或者融合片段2139与2-Phenylquinolone(位于口袋S1)设计若干个小分子化合物进行Docking。Schrodinger软件包下载Glide做模拟对接,预测蛋白与小分子的结合模式和强弱。我们对具有催化活性的EV71 2A蛋白酶结晶条件进行筛选,希望获得其晶体结构,为设计共价抑制剂奠定基础。此外,我们成功表达纯化出HRV2 2A蛋白酶,扩大针对2A蛋白酶药物设计范围。