目的树突状细胞（Dendritic cells,DC）是一种异质性的细胞群体,在非淋巴组织中主要分为CD103⁺DC和CD103^-DC。据报道CD103^-DC主要通过交叉提呈抗原激活CD8⁺T细胞参与抗肿瘤免疫,而CD103⁺DC是否参与抗肿瘤免疫以及相应的细胞学机制尚不清楚。依据DC具备与NK细胞发生交互作用的特点,我们推测CD103⁺DC可能通过影响NK细胞发挥抗肿瘤作用。本实验通过将黑色素瘤种植于CD103⁺DC缺陷小鼠(Batf3^-/-小鼠)及野生型小鼠背部皮下,主要探讨了CD103⁺DC缺陷对黑色素瘤生长的影响,以及对肿瘤组织浸润NK细胞数量和功能的调控,以期揭示CD103⁺DC抗肿瘤的作用机理。方法1.将B16细胞株接种于C57BL/6及Batf3^-/-小鼠（CD103⁺DC缺陷）背部皮下,1?10⁶个细胞/只,动态监测肿瘤大小并绘制肿瘤生长曲线;第14天处死小鼠,取出肿瘤拍照并称重,观察肿瘤大小及重量变化。以此来探讨CD103⁺DC在抗黑色素瘤免疫应答中的作用。2.培养杂交瘤2.43细胞株收集上清,腹腔注射给C57BL/6及Batf3^-/-小鼠,3ml/只,隔天注射一次以清除小鼠体内CD8⁺T细胞,皮下种植B16细胞株,动态监测小鼠肿瘤大小并绘制肿瘤生长曲线;培养杂交瘤PK136细胞株收集上清,腹腔注射给C57BL/6及Batf3^-/-小鼠,3ml/只,连续注射3天以清除小鼠体内的NK细胞,皮下种植B16细胞株,动态监测小鼠肿瘤大小并绘制肿瘤生长曲线。以此来探讨CD103⁺DC在抗黑色素瘤免疫过程中对CD8⁺T细胞及NK细胞的调控作用。3.体外e450-7AAD法检测C57BL/6小鼠及Batf3^-/-小鼠脾脏NK细胞的杀伤活性。4.流式细胞仪检测C57BL/6及Batf3^-/-小鼠肿瘤组织内浸润的NK细胞数目,提取肿瘤组织的mRNA,检测趋化NK细胞的趋化因子及炎症因子的表达水平,以此来探讨抗黑色素瘤免疫过程中CD103⁺DC对肿瘤组织浸润NK细胞数目的影响。5.流式细胞仪检测肿瘤组织浸润的NK细胞亚群以及NK细胞亚群表面受体及FasL的表达水平,以此对CD103⁺DC在抗黑色素瘤免疫过程中调控NK细胞亚群的机理进行初步探讨。结果1.小鼠背部皮下接种B16后,第4天可触及皮下肿瘤,Batf3^-/-荷瘤小鼠与野生型荷瘤小鼠相比:肿瘤生长较快,第12天肿瘤大小开始出现差异,第14天肿瘤体积及重量显著增大。该结果说明CD103⁺DC在抗黑色素瘤的免疫反应中发挥着重要作用。2.野生型荷瘤小鼠体内清除CD8⁺T细胞后,肿瘤生长速度较正常荷瘤小鼠更为快速,说明CD8⁺T细胞具有抗肿瘤的作用;Batf3^-/-荷瘤小鼠无论体内是否清除CD8⁺T细胞,对肿瘤的生长没有影响,说明CD8⁺T细胞的抗肿瘤作用依赖于CD103⁺DC,提示CD103⁺DC在上游调控CD8⁺T细胞发挥抗肿瘤的作用;重要的是,Batf3^-/-荷瘤小鼠较清除CD8⁺T细胞的野生型荷瘤小鼠肿瘤生长更快,提示CD103⁺DC除了调控CD8⁺T细胞,还可通过其他机制参与抗肿瘤免疫。我们进一步探讨了NK细胞在抗黑色素瘤免疫反应中的作用,发现野生型荷瘤小鼠体内清除NK细胞后,肿瘤生长速度较正常荷瘤小鼠显著性增高,说明NK细胞具有抗肿瘤作用;Batf3^-/-荷瘤小鼠无论体内是否清除NK细胞,对肿瘤的生长没有影响,说明NK细胞的抗肿瘤作用依赖于CD103⁺DC,提示CD103⁺DC在上游调控NK细胞发挥抗肿瘤的作用。3.体外NK细胞杀伤活性检测发现,Batf3^-/-小鼠与野生型小鼠相比,脾脏NK细胞杀肿瘤效应显著减弱,说明CD103⁺DC可调控NK细胞的杀伤活性。4.进一步对肿瘤组织浸润的NK细胞数量进行检测,发现Batf3^-/-荷瘤小鼠与正常野生型荷瘤小鼠相比,肿瘤组织内浸润的NK细胞数量显著减少;通过qPCR检测肿瘤组织中的细胞因子水平,我们发现具备趋化NK细胞能力的趋化因子XCL1和CXCL10表达水平显著降低,同时肿瘤组织内促炎因子TNF-α和IFN-γ的表达水平也显著降低。这些结果说明CD103⁺DC缺陷时,会影响肿瘤组织内浸润的NK细胞数量,这可能与肿瘤微环境发生改变有关。5.流式分析发现:荷瘤小鼠肿瘤组织浸润的NK细胞包括CD49a⁺DX5^-NK细胞亚群和CD49a^-DX5⁺NK细胞亚群;CD103⁺DC缺陷时,肿瘤内CD49⁺DX5^-NK细胞亚群FasL表达水平下降,激活性受体2B4和NKG2D表达水平下降;CD49a^-DX5⁺NK细胞亚群激活性受体2B4表达下降,而抑制性受体KIRG1和NKG2A表达显著升高。该结果说明,CD103⁺DC缺陷会影响肿瘤组织内NK细胞亚群表面受体的表达,可能导致NK细胞抑制性信号占优势,从而促进肿瘤的生长。结论CD103⁺DC可通过调控NK细胞参与抗肿瘤免疫,黑色素瘤中浸润的NK细胞包含CD49a⁺DX5^-NK细胞及CD49a^-DX5⁺NK细胞两个亚群,CD103⁺DC不仅影响肿瘤组织中浸润NK细胞的数量,还可影响肿瘤组织中NK细胞亚群表面受体及功能分子的表达。