盖塔病毒（Getah virus,GETV）感染可导致马出现发热、全身皮疹和腿水肿,仔猪关节炎和母猪生殖障碍等。2018年我国受到GETV影响的省份（直辖市、自治区）急剧增加到16个。近年来,GETV逐步在猪群中暴发,给我国经济带来了严重损失,对公共卫生构成了巨大威胁。目前,对感染GETV的动物还没有特异性的抗病毒治疗方法。此外,GETV的理化特性、致病性和流行性等特性在很大程度上是未知的。本研究首先分析了GETV包膜糖蛋白E2序列,去除其胞内域和疏水区,对GETV E2蛋白进行原核表达,并成功制备能与GETV E2蛋白特异性结合的多克隆抗体。在后续的试验中将制备的E2蛋白作为包被抗原建立了猪GETV E2间接ELISA检测方法,并用建立的方法对四川省猪群中GETV流行情况进行血清学流行病学调查,血清流行病学调查结果显示四川省猪群中盖塔病毒阳性率为11%,表明需要加强GETV疾病监测及防控,同时进一步说明该间接ELISA方法可以用于临床大规模检测。随后我们探究了黄芩提取物体外抗GETV病毒活性,并且利用试验制备的GETV E2多克隆抗体对其作用机制进行了初步探究。以期对四川省GETV的防控及抗GETV药物研发提供依据。1.猪盖塔病毒E2蛋白的原核表达及多克隆抗体制备本研究利用生物信息学软件对GETV（Gen Bank:MK693225）E2序列进行分析,去除胞内域和疏水区片段,设计特异性引物扩增E2目的片段,克隆至p Cold-TF载体,最终将其转化至表达工程菌Ecoli.BL21,对其进行原核表达及条件优化,SDS-PAGE结果表明重组E2蛋白成功以可溶性蛋白形式表达,经纯化浓缩后测得重组E2蛋白浓度为14 mg/m L,Western blot实验结果表明制备的重组E2蛋白特异性良好,能与GETV阳性血清抗体特异性结合。用制备的重组E2蛋白免疫小鼠,制备鼠源GETV E2多克隆抗体血清,经Western blot和IFA验证结果表明制备的多抗特异性良好,能与重组E2蛋白及GETV特异性结合。重组E2蛋白的高效表达及多克隆抗体的制备为本课题后续研究提供材料支撑,同时为GETV病毒及蛋白的结构和功能的进一步研究奠定基础。2.GETV间接ELISA方法的建立及四川省GETV血清学流行病学调查将制备的重组E2蛋白作为包被抗原,建立GETV间接ELISA方法,结果表明该方法特异性强,与APPV、CSFV等均不会发生交叉反应;敏感度高,将猪GETV阳性血清进行1:640稀释时,仍能测出阳性;重复性良好,批间与批内变异系数均小于10%;与间接免疫荧光相比,总符合率为96.7%。后续研究中用建立的间接ELISA方法检测了四川省2020年5月-2021年12月期间于四川省不同规模化猪场收集的1000份猪血清,检测到110份阳性,阳性率为11%。3.黄芩提取物体外抗GETV活性探究体外实验在BHK-21细胞上探究黄芩提取物对GETV复制周期的抑制作用,首先用MTT实验检测黄芩提取物对BHK-21细胞的细胞毒性,试验采用q RT-PCR在RNA水平检测其抗GETV的机制,并且使用前期实验中制备的GETV E2多克隆抗体,用Western Blot实验在蛋白水平检测药物抗病毒活性。实验结果表明黄芩提取物能显著减少GETV感染BHK21引起的细胞病变,能有效减少GETV病毒载量,并且能减少GETV E2蛋白的表达。黄芩提取物在GETV吸附和进入细胞阶段的抑制作用最显著,IC50分别为3.69μg/ml、3.94μg/ml。当黄芩提取物浓度浓度为10μg/ml时,抑制吸附率可达95.08%。研究结果表明黄芩提取物在体外能有效抑制GETV病毒感染,为GETV的防控及抗病毒药物研发提供了一定参考。