Dot-ELISA检测鸡新城疫抗体方法的建立与应用研究

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本研究用提纯的新城疫病毒和自制的酶标抗体建立了检测鸡新城疫抗体的Dot-ELISA方法。试验中用F48E9株和LaSota株提纯抗原并对两者进行了比较。以纯化的鸡IgG免疫兔,制备辣根过氧化物酶标记的兔抗鸡IgG。抗原最适包被浓度为8.9μg/ml,酶标抗体最适工作浓度为1:400,确定了其他反应试剂和各步的最佳反应时间。阻断试验和交叉试验表明快诊膜具有良好的特异性:不与马立克、法氏囊、鸡痘、鸡传支、鸡传喉、鸡减蛋综合症、鸡传鼻、鸡沙门氏菌等阳性血清反应。批内和批间重复性试验表明该法重复性良好。诊断膜片4℃至少可保存6个月,其特异性、灵敏性不变。检测150份血清,Dot-ELISA阳性92份(占61.3%);HI阳性77份(占51.3%),Dot-ELISA检出的抗体滴度比HI高2~4个滴度,初步确定了该方法的临界保护值为1:64。本法检测抗体2.5小时内即可完成,结果客观,肉眼容易判定,不需要特殊仪器。结果表明Dot-ELISA简便、快速、灵敏、特异,重复性好,稳定可靠,快诊膜便于寄送、保存;各种试剂和材料都可作到标准化。诊断该方法适合基层单位用于新城疫抗体监测、诊断和疫病普查。
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