第一部分 地塞米松对小鼠骨髓来源的成骨细胞核心结合因子β蛋白表达的影响 通过Western blot实验分析地塞米松对骨髓来源的成骨细胞核心结合因子β蛋白表达的影响,探讨骨髓基质干细胞体外向成骨细胞定向分化的机制.方法:取雄性8周ICR小鼠股骨骨髓基质细胞进行原代和传代培养,在细胞培养同时间点加入10<-8>M地塞米松(实验组)或保持基础培养条件(对照组).于不同时间点提取细胞核基质蛋白后,应用Western blot实验分析地塞米松对骨髓来源的成骨细胞核心结合因子β蛋白的表达.通过其表达观察地塞米松对上述成骨细胞转录因子的的影响.结论:10<-8>mol/L地塞米松促进小鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化,而这种促分化作用可能与提高促成骨细胞分化的转录因子水平有关.第二部分 辛伐他汀对小鼠骨髓来源的成骨细胞增殖的影响 通过观察培养的骨髓基质干细胞形态和细胞增殖实验来分析辛伐他汀对骨髓来源的成骨细胞形态及分裂增殖的影响.方法:培养细胞分为实验组(培养基中含地塞米松10<-8>mol/L和辛伐他汀浓度分别为10<-5>、10<-6>、10<-7>mol/L)和对照组(培养基中含地塞米松10<-8>mol/L和配制辛伐他汀溶液的对照液).原代培养小鼠骨髓基质细胞于标准培养基中(不含地塞米松),第5天细胞传代.传代细胞按2000个细胞/孔接种于96孔培养板中,于传代培养当日分别加入含辛伐他汀10<-5>、10<-6>、10<-7>mol/L的培养基,各组分别以加地塞米松为对照组.采用CellTiter96试剂盒(Promega)以2日为间隔分别测定各试验组与对照组中每孔细胞数.结论:辛伐他汀具有抑制骨髓基质干细胞体外增生并促进细胞外基质矿化的作用,而且这种作用具有浓度的依赖性.第三部分 地塞米松、辛伐他汀对小鼠骨髓来源的成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白表达的影响 通过基因转染的方法分析地塞米松、辛伐他汀对小鼠成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白的表达的影响以及确认培养的成骨细胞的分化阶段.方法:取雄性8周ICR小鼠股骨骨髓基质细胞加入10<-8>mol/L地塞米松进行原代培养,在细胞培养第五天传代,传代后加入10<-6>mol/L辛伐他汀或保持基础培养条件.于不同时间点转染连有绿色荧光蛋白的质粒,用荧光显微镜观察、拍照.结论:1.小鼠骨髓来源的间充质细胞,在传代培养第二天出现成骨细胞特征 2.地塞米松和辛伐他丁联合应用促进成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白的表达.