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目的:1.探索细胞外ATP在肾缺血再灌注性损伤(I/R)中的作用,明确其是否可以诱导肾脏炎症;2.观察e ATP是否通过P2X7R诱导肾小管上皮细胞炎症;3.探索e ATP/P2X7R是否通过NLRP3炎症体参与肾脏I/R损伤。方法:体内实验:雄性C57BL/6小鼠及P2X7R(-/-)小鼠随机分为假手术组(Sham)和I/R组,野生型小鼠术后30min尾静脉注射Apyrase或A438079治疗。通过一侧肾切对侧肾蒂夹闭35min建立AKI模型。造模后24h收集小鼠尿、血清及肾组织。体外实验:体外培养人肾小管上皮细胞(HK2),予低氧24h/复氧8h(H/R)或ATP 4m M 8h处理。给予不同浓度Apyrase处理。通过转染P2X7R si RNA或NLRP3si RNA观察P2X7R及NLRP3对细胞H/R及ATP损伤的影响。生化方法检测小鼠血清肌酐、尿素氮水平。PAS染色观察肾结构损害;化学发光法检测尿及细胞上清ATP水平;免疫组化或免疫荧光染色定位肾组织ATP5a、ATP5b、IL-18、cleaved caspase-1、F4/80、IL-1 beta、CD68、P2X7R、NLRP3的表达;real-time PCR及免疫印迹检测肾组织ATP合成酶、P2X7R、NLRP3炎症体、IL-1 beta的基因及蛋白表达水平。结果:体内实验:肾脏I/R诱导小鼠尿ATP水平升高但ATP合酶表达无明显变化。I/R小鼠肾功能下降,肾脏结构损害,炎症因子及炎症细胞浸润增加,Apyrase治疗后改善。I/R组小鼠肾脏NLRP3、cleaved caspase-1水平增多,Apyrase或A438079治疗后降低。另外,P2X7R(-/-)I/R小鼠肾功能、肾脏炎症因子及因子细胞浸润较野生型小鼠相比明显改善。体外实验:H/R诱导HK2细胞ATP释放增多,IL-1 beta m RNA及IL-1 beta蛋白活化水平增加,Apyrase处理后改善,P2X7R si RNA转染或NLRP3 si RNA转染后改善。P2X7R si RNA转染还降低H/R诱导的NLRP3、ASC、cleaved caspase-1表达升高。结论:降低细胞外ATP水平或P2X7R基因敲除通过抑制肾小管上皮细胞NLRP3炎症体活化改善肾脏缺血再灌注损伤,并降低肾脏炎症。