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目的:羧甲基壳聚糖(Carboxymethyl chitosan,CM-CTS)是迄今为止所报道的600多种甲壳素衍生物中,研究最多的一种水溶性壳聚糖衍生物。研究证明,CM-CTS具有良好的生物相容性、生物降解性、降解可控性和抑菌性,它以其特有的理化性质已成为医药界及生物医学领域的研究热点。但CM-CTS在制备过程中要经过较长时间的浓碱高温等条件,故制成的CM-CTS的相对分子量和黏度会显著降低,作为医用高分子材料,在体内降解吸收太快,难以满足生物高分子材料的要求,因此在一定程度上限制了CM-CTS的应用范围。已有研究表明,CM-CTS具有一定的免疫调节作用。本研旨在探讨一种通过交联使CM-CTS黏度得到极大提高的的方法,并对其生物相容性及其作为免疫佐剂的应用前景进行研究。方法:实验分四部分:1、对CM-CTS的制备、纯化方法及部分理化性质进行研究,通过细胞毒性和组织相容性对CM-CTS的生物相容性进行了初步评价。2、以戊二醛作为交联剂,通过对交联剂加入量、交联体系温度、pH值以及交联反应时间等交联条件的试验,确定了所需要的交联反应体系;对CM-CTS进行适度交联,制备了具有一定交联度的交联型羧甲基壳聚糖(C-CM-CTS)和交联还原型羧甲基壳聚糖(D-CM-CTS)。3、以体外培养的小鼠成纤维细胞株L929为研究对象,对C-CM-CTS和D-CM-CTS进行细胞毒性评价,考查了二者的组织相容性。4、研究D-CM-CTS的溶血活性,通过MTT法测定了D-CM-CTS体外对Con A诱导的小鼠淋巴细胞增殖反应的影响。以不同剂量的D-CM-CTS联合卵清白蛋白(OVA)免疫小鼠,观察D-CM-CTS对OVA受免小鼠细胞免疫和体液免疫应答的影响。结果:1、制备了高纯度,无菌无热原的CM-CTS,细胞毒性结果表明CM-CTS对L929成纤维细胞没有明显的毒性作用,并且对L929细胞增殖有一定的促进作用,其中以100g/mL浓度对L929细胞的促增殖作用最为显著;肌肉注射8天后观察不到炎症细胞,说明CM-CTS具有良好的生物降解性和组织相容性。2、通过戊二醛和CM-CTS的适度交联,制备了黏度提高170倍且能溶于水的C-CM-CTS和D-CM-CTS。3、细胞毒性和组织相容性试验表明D-CM-CTS比C-CM-CTS具有更好的生物安全性,该结果为D-CM-CTS在生物医用材料、药物缓释载体等的研究和应用方面提供了一定的理论基础。4、溶血性实验表明D-CM-CTS没有溶血作用,D-CM-CTS在1-1000μg/mL浓度范围内对Con A诱导的小鼠T淋巴细胞的增殖反应有显著促进作用,其中1和10μg/mL浓度促进作用极显著;不同剂量D-CM-CTS联合OVA免疫小鼠后,均能增强Con A和OVA诱导的OVA受免小鼠脾淋巴细胞增殖反应和提高OVA特异性抗体的效价水平,其中以2.5%组免疫效果最好。结论:本研究制备的D-CM-CTS可将CM-CTS黏度提高170倍,无细胞毒性并能促进细胞增殖,且具有良好的生物相容性。将D-CM-CTS联合OVA免疫小鼠,证明D-CM-CTS具有良好的免疫佐剂活性。该研究结果为D-CM-CTS在生物医用材料、药物缓释载体等的研究和应用方面提供了理论基础。