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Enzalutamide是用于治疗去势抵抗性前列腺癌(Castration-resistant Prostate Cancer,CRPC)的第二代雄激素受体(Androgen Receptor,AR)拮抗剂。但很遗憾,AR的功能性紊乱意味着患者最终会对enzalutamide产生耐药性。这种功能性紊乱包括AR基因扩增,AR剪接突变体以及AR点突变等,因此急需开发新的药物来治疗这种难治性疾病。雷公藤甲素(Triptolide,TPL)是一种从中药雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook F.)中提取的主要活性化合物,由于其表现出抑制炎症、囊肿、免疫抑制等多种生物活性,特别是TPL的抗肿瘤活性,使其成为药物研究领域的研究热点。已有研究表明TPL在前列腺癌细胞中具有抗癌活性。然而,TPL对CRPC细胞的影响和潜在机制仍处于未知阶段。因此,本文主要以CRPC细胞为模型,研究TPL的抗癌活性以及作用机制,主要取得以下结果:1.通过內源和外源性报告基因实验,结果表明低浓度TPL可以抑制AR-FL和AR-Vs(AR-V7和AR-V567es)的转录活性而不改变其蛋白质水平。通过实时定量PCR以及western bloting技术,检测AR以及AR-Vs下游靶基因的mRNA水平以及PSA蛋白含量。结果表明TPL可以显著抑制AR以及AR-Vs下游靶基因的表达,并能下调PSA的蛋白质水平。2.通过使用CDK7选择性抑制剂BS-181和染色质免疫共沉淀技术分析TPL在AR S515磷酸化的作用机制。结果表明TPL下调pAR S515的蛋白质水平,而对CDK7,XPB等一系列蛋白无影响。TPL可以显著抑制AR结合到PSA启动子以及RNA pol II,从而抑制AR转录活性。通过RNA干扰技术敲降XPB,发现其效果与TPL的作用相似。这些结果揭示TPL抑制AR转录活性是通过CDK7/XPB途径抑制AR S515磷酸化得以实现。3.通过多种CRPC细胞模型检测低浓度TPL的细胞毒性,结果表明低浓度TPL可以降低表达AR或AR-Vs的前列腺癌细胞的增殖能力,并诱导细胞凋亡。4.通过MTT实验,细胞克隆形成实验以及Western bloting实验检测TPL和enzalutamide的联合作用效果。结果表明低浓度TPL与enzalutamide具有协同效应,在体外可以抑制CRPC细胞的增殖和克隆形成能力,诱导PARP和Caspase 3的切割。制作22Rv1异种移植瘤模型检测两者的体内效果,发现在CRPC异种移植瘤模型中TPL提高了enzalutamide的抗癌效果。综上所述,本研究的结果表明,TPL通过CDK7/XPB途径抑制AR S515磷酸化从而抑制AR-FL和AR-Vs的转录活性。体内和体外的实验证实TPL是一个治疗CRPC的潜在药物,并可结合enzalutamide来治疗CRPC。