一种新CD44变异体(CD44V17)在乳腺癌中的表达及其与多药耐药相关性的研究

来源 :江苏大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhufeng19791123
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目的:1.通过对一种新的CD44变异体(CD44v17)基因表达量的检测,了解其在乳腺癌组织中的表达情况,探讨其表达与肿瘤大小、分期、淋巴结转移、组织学类型、ER、PR及cerbB-2的关系。2.通过对CD44v17和MDR1基因表达量的检测,了解CD44v17和MDR1基因在乳腺癌组织中表达水平的相关性及其临床意义。方法:1.从MCF-7/Adr细胞中提取总RNA进行RT-PCR,获得全长cDNA模板,根据本实验室在MCF-7/Adr中新发现的一种CD44剪切拼接变异体CD44v17(Gene Bank NO.FJ216964)和MDR1基因设计特异性荧光定量PCR引物,从而获得CD44 v17和MDR1基因产物,PCR产物于2%琼脂糖凝胶电泳后切胶回收,并参照胶回收试剂盒说明书对PCR产物进行回收,纯化。2.将PCR纯化产物连接于pMD19-T simple vector上,TA克隆后,提取质粒并测定含量及进行双酶切反应验证,将阳性质粒进行DNA测序。3.将含有目的基因的阳性质粒用Eppendof Bio-photometer测定浓度,按公式:C×10-8/(R+3000)×3.415×6.02×1023(copies/μ1)计算质粒拷贝数,稀释成108~104 5个梯度浓度的标准品。4.应用SYBR Green I荧光染料,采用real time PCR法检测52例乳腺癌组织及相应癌旁组织CD44v17 mRNA.MDR1 mRNA的表达,根据标准曲线计算出CD44v17 mRNA. MDR1 mRNA的表达量,分析CD44v17的表达与乳腺癌临床参数的关系,并探讨其与MDR1基因表达的相关性。结果:1.乳腺癌组织中CD44v17 mRNA表达为3.10±1.12.相应癌旁组织的表达为2.31±0.84;乳腺癌组织CD44v17 mRNA表达明显高于相应癌旁组织(P<0.01)。2.乳腺癌肿瘤>5cm组CD44v17 mRNA表达为4.18±0.95,乳腺癌肿瘤≤5cm组CD44v17 mRNA表达为2.96±1.07,乳腺癌肿瘤>5cm组CD44v17 mRNA表达明显高于乳腺癌肿瘤≤5cm组(P<0.05);淋巴结转移组CD44v17 mRNA表达为4.07±1.13,淋巴结无转移组CD44v17 mRNA表达为2.75±0.89,淋巴结转移组CD44v17 mRNA表达明显高于淋巴结无转移组(P<0.01);髓样癌CD44v17 mRNA表达为5.27±0.30,导管内癌CD44v17 mRNA表达为3.28±1.08,浸润性导管癌CD44v17 mRNA表达为2.92±1.04,髓样癌CD44v17 mRNA表达显著高于导管内癌和浸润性导管癌(P<0.05),导管内癌和浸润性导管癌CD44v17 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05);临床Ⅲ期CD44v17 mRNA表达为4.18±0.92,临床Ⅱ期CD44v17 mRNA表达为2.76±0.96,临床Ⅰ期CD44v17 mRNA表达为2.73±0.97,临床Ⅲ期CD44v17 mRNA表达明显高于Ⅰ、Ⅱ期(P<0.05),临床Ⅰ期和Ⅱ期CD44v17 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05);ER(+)组CD44v17 mRNA表达为3.19±1.17,ER(-)组CD44v17 mRNA表达为3.03±1.10,PR(+)组CD44v17 mRNA表达为3.12±1.15,PR(-)组CD44v17 mRNA表达为3.09±1.12,cerbB-2(+)组CD44v17 mRNA表达为3.16±1.12,cerbB-2(-)组CD44v17 mRNA表达为2.98±1.14,乳腺癌组织中CD44v17 mRNA的表达与ER、PR及cerbB-2的表达无明显相关性(P>0.05)。3.乳腺癌组织中MDR1mRNA表达为2.37±0.98,相应癌旁组织的表达为1.95±0.77,乳腺癌组织的MDR1 mRNA表达明显高于相应癌旁组织(P<0.01)。4.在乳腺癌组织中CD44v17与MDR1基因的表达呈正相关(r=0.809,P<0.01)。结论:1.CD44v17 mRNA在乳腺癌组织中高表达,在乳腺癌的发生发展中起重要作用,可能与乳腺癌的侵袭、转移及预后有关。2.在乳腺癌中CD44v17的表达与MDR1的表达密切相关,两者同时高表达提示患者预后不良。
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