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【目的】大面积的软骨缺损的治疗一直都是骨科临床治疗的难点。目前软骨缺损修复方法较多,如骨软骨移植修复、软骨膜或骨膜移植修复、自体软骨细胞移植修复等,但组织工程学方法仍然是当前研究的热点。组织工程学方法包括种子细胞离体培养、支架材料研究和组织工程化组织构建研究等。很多学者报道采用不同复合材料构建组织工程支架,但大多数实验均未考虑种子细胞在支架材料上的分裂、增殖、迁移能力及材料本身的降解作用对细胞活性的影响。本研究采用纳米羟基磷灰石(nHA)-聚乳酸羟基乙酸共聚物(PLGA)材料构建新型多孔复合支架,并与兔软骨细胞体外共培养,研究新型多孔复合支架材料纳米羟基磷灰石(nHA)-聚乳酸羟基乙酸共聚物(PLGA)的生物相容性,探讨其作为软骨组织工程支架的可行性。【方法】本实验采取冷冻快速成型法制得纳米羟基磷灰石/聚乳酸聚乙醇酸(nHA/PLGA)复合支架呈立方形,切块经CO60灭菌后干燥备用。将胎兔膝关节软骨细胞分别接种于纳米羟基磷灰石/聚乳酸聚乙醇酸复合支架(A组)和细胞培养板上(B组),体外共同培养1、3、5、7、9天后,用酶联免疫检测仪检测各孔在490nm波长下光密度值,绘制细胞活性对比图;倒置显微镜下放大100倍观察1、3、5天时细胞生长情况;扫描电镜观察1、3、5天时细胞黏附情况;流式细胞仪检测处于Go/G1,G2/M,S各阶段细胞,并计算增殖指数(PI)进行统计学分析。【结果】软骨细胞在A组,分别培养1、3、5、7、9天后测得光密度均值为0.286、0.507、0.605、0.661、0.756,在B组中,分别为0.201、0.507、0.608、0.639、0.743,两组数据差异经分析无统计学意义,细胞增殖活性无明显差异(P﹥0.05)。倒置显微镜观察A、B两组,软骨细胞呈三角形、扁圆形及多角形外观,有数量不等、长短及粗细不一的突起,细胞通过突起相互间接触,随着时间增加,细胞进一步分化、增殖,并开始规则叠层生长。扫描电镜观察,形态学分析显示出细胞在材料表面上均伸展良好,呈梭形或鳞片状。随着共培养时间的增加,材料上的细胞增多并逐渐融合。细胞培养7天后,流式细胞仪检测A组与B组软骨细胞呈正常形态,均未见异常二倍体细胞形成。nHA/PLGA材料对兔软骨细胞生长周期影响不大,两组间增殖指数差异无显著性意义(P>0.05)。【结论】本实验通过MTT检测、倒置显微镜、扫描电镜观察以及细胞周期的分析,间接或直接的反映了nHA/PLGA作为支架材料具有良好的生物相容性。MTT检测细胞活性,是通过测得活细胞染色后漂洗液光吸收值的方法间接反映的。活性细胞越多,光吸收值就越大,说明支架材料本身不影响软骨细胞的增殖。倒置显微镜和扫描电镜通过观察不同时期的共培养细胞,可以看到随着培养时间的延长,软骨细胞能够正常的黏附在支架表面,并快速分裂增殖。流式细胞仪检测分析发现支架对软骨细胞生长周期无影响,且实验过程中未发现异常二倍体细胞生成,说明支架材料无致瘤性。总的说来,本实验研究中nHA/PLGA多孔支架材料对软骨细胞的黏附、生长、增殖和分化均没有不良作用,是一种细胞相容性良好的软骨组织工程支架材料。