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为了探讨氟化物对机体骨骼代谢的影响和骨钙素(OCN)在氟中毒所致骨相损害中的作用，本研究采取酶完全消化法或酶半消化植块培养法，以小鼠(初生24h)和胎羊(2～3月龄)头盖骨为材料分离成骨细胞，通过形态观察(Giemsa染色)、碱性磷酸酶(ALP)和钙化结节(VonKossa)染色来鉴定细胞，并进行传代培养；从体外培养的成骨细胞提取总RNA，经RT-PCR扩增出OCN基因序列，经克隆、蓝白斑筛选、质粒的限制性内切酶酶切鉴定后，进行测序和生物信息学分析；利用实时荧光定量PCR来检测不同浓度NaF对体外培养成骨细胞OCN基因表达的影响。结果表明：
1.在10mMβ-甘油磷酸钠和50μg/mL维生素C诱导培养下，分离的小鼠、绵羊成骨细胞确实表达OCN基因。绵羊OCN基因编码区全长297bp，较人和牛的OCNcDNA少3个核苷酸；BLAST-N分析表明与黄牛OCNmRNA序列的同源性为95％，与人的同源性为88％。绵羊OCN的测序结果已被GeneBank收录，登录号为DQ418490。
2.成骨细胞在体外诱导培养下，第3d即有OCNmRNA的表达，对照组和5×10-4mol/LNaF组分别在第7d和第11d达高峰；高峰过后OCNmRNA的表达急剧减少，之后则呈缓慢下降趋势，至19d仍有表达。除了第7d，5×10-4mol/LNaF组OCN基因在各时间段的表达均较对照组高。另外，各浓度NaF均能刺激体外培养成骨细胞OCN基因的表达，且呈剂量依赖关系，当浓度为5×10-4mol/L时OCN基因表达量的增加最为明显，约为对照组的30倍。