基于NO/cGMP与NF/κB信号通路探究水蛭治疗高脂血症ED的机制

来源 :南京中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Garyzhaoqi
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目的:通过动物实验探究水蛭对高脂血症型勃起功能障碍作用机制,从而为中医药治疗勃起功能障碍提供理论支持。方法:1.高脂血症勃起功能障碍动物模型建立通过交配实验排除性功能障碍的大鼠,然后将大鼠随机分为两组,空白组与模型组并进行眼眶取血测血糖血脂;通过高脂饲料喂养大鼠模型组八周后进行眼眶取血测血糖血脂;在通过APO实验筛选勃起功能障碍的大鼠,得到高脂血症勃起功能障碍大鼠。2.水蛭治疗高脂血症ED的动物勃起功能指标观察选取第一部分的高脂血ED大鼠48只SPF级雄性SD大鼠与12只空白组大鼠,每组六只,随机分为治疗四周的空白组、模型组、水蛭低剂量组、水蛭高剂量组、他达拉非组与治疗八周的空白组、模型组、水蛭低剂量组、水蛭高剂量组、他达拉非组。采用阿朴吗啡(APO)实验、颈动脉压测定(MAP)、阴茎海绵体内压测定(ICP)来检测大鼠勃起功能。3.基于NO/cGMP与NF/κB信号通路探究水蛭对高脂血症ED作用机制的分子实验对检测过勃起功能的大鼠进行取材,并开展分子实验。通过全自动生化仪分析大鼠血糖血脂;通过HE染色观察大鼠阴茎与肝组织的病理变化,通过试剂盒测定大鼠血清总超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)表达量;最后通过Western blotting法测定阴茎组织中PDE5A、eNOS、NF-κB、MCP-1 的表达情况。结果:1.高脂血症勃起功能障碍动物模型建立交配实验发现有一只大鼠性功能障碍;高脂饲料喂养八周后模型大鼠的TC是空白组四倍左右;高脂饲料喂养八周后,约有77%的大鼠出现勃起功能障碍。2.水蛭治疗高脂血症ED的动物勃起功能指标观察治疗四周与八周后,模型组与空白组相比平均勃起次数显著降低(P<0.05);治疗组与模型组相比,治疗组中除八周水蛭低剂量组,均具有显著上调模型动物平均勃起次数的效果(P<0.05),其中水蛭高剂量组的勃起率最高。治疗四周与八周后,治疗组与模型组相比,治疗组能显著上调ICPmax/MAP(P<0.05)。其中水蛭高剂量组在改善勃起率上取得了最佳治疗效果,且在四周治疗组中效果最优;八周治疗组水蛭低剂量组在改善平均勃起次数方面效果最优。3.基于NO/cGMP与NF/κB信号通路探究水蛭对高脂血症ED作用机制的分子实验四周治疗组中,不同剂量的水蛭治疗组均能降低血脂中TC、LDL的水平(P<0.05),此外亦能改善氧化应激指标SOD、MDA、ox-LDL在血清中的表达量(P<0.05)。模型组与空白组HE切片比较,内皮细胞局部破坏,伴有炎性渗出,肝细胞内可见大小不等脂肪颗粒,周围可见少量炎症细胞浸润;对WB结果进行分析,空白组与模型组相比,模型组的阴茎组织中eNOS、PDE5A蛋白表达均显著下调(P<0.05),MCP-1、NF-κB蛋白表达均显著上调(P<0.05);治疗组与模型组相比,水蛭低剂量组能显著上调PDE5A、eNOS的蛋白表达,水蛭高剂量组能显著上调eNOS的蛋白表达;水蛭高剂量组与他达拉非组能显著下调MCP-1蛋白的表达;水蛭低剂量组与水蛭高剂量组能显著下调NF-κB蛋白表达,其中水蛭高剂量效果最佳。(P<0.05)。治疗八周组中,模型组的LDL、TC均显著高于与空白组(P<0.05);各治疗组与模型组相比,治疗组均能下调LDL、TC、TG水平,其中水蛭低剂量组能显著下调TC水平(P<0.05),水蛭高剂量组能显著下调LDL水平(P<0.05);模型组与空白对照组HE切片比较,情况较治疗四周组基本一致,模型组炎性渗出更多,肝细胞脂肪颗粒也更密集;模型组与空白对照组比较,阴茎组织中MCP-1、NF-κB蛋白表达均上调显著(P<0.05),阴茎组织中eNOS蛋白表达下调显著(P<0.05)。治疗组与模型组相比,水蛭低剂量组与他达拉非组能显著上调eNOS蛋白表达,其中他达拉非组效果优于水蛭低剂量组。水蛭低剂量组能显著下调NF-κB、MCP-1蛋白表达(P<0.05)。结论1.高脂饲料喂养的方式可以成功建立高脂血症大鼠ED模型;2.不同治疗剂量与不同治疗时间的水蛭均能改善高脂血症ED大鼠的血供,修复勃起功能,提高勃起率,并且可能与治疗时间成正相关;3.不同治疗剂量与不同治疗时间的水蛭均能改善高脂血症ED大鼠的血脂水平;4.水蛭能降低脂血症ED大鼠氧化应激水平,改善大鼠肝组织的脂质浸润与阴茎组织的内皮功能障碍;5.水蛭可能通过NO/cGMP信号通路改善内皮功能障碍,恢复勃起功能6.水蛭可能通过NF-κB信号通路发挥抗炎作用,改善内皮功能障碍,促进勃起功能。
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