酿酒酵母醛糖还原酶gre3基因的敲除研究

来源 :暨南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhuyong006
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
在不同配型的单倍体AS7和AS21中,利用LHF-PCR(Long homology flanking-PCR)将醛糖还原酶基因gre3缺失,并引入栖瘤胃真菌Piromyces sp. E2的木糖异构酶基因(xylA)和树干毕赤酵母(Pichia stipits)的木酮糖激酶(xks1),杂交融合成双倍体,探究其利用木糖生长发酵、乙醇和木糖醇生成情况。  以载体pGAPZαA为骨架,切去GAP启动子、α-信号肽基因以及AOX终止子、TEF1启动子;将gre3的启动子和终止子引入载体,构建出 gre3基因敲除骨架载体pGREZ。以pGREZ载体为骨架,将 xks1克隆入载体 pGREZ,构建出单基因置换型表达载体pGREZ-xks1,再引入xylA,构建出双基因共表达pGREZ-xylA-xks1。利用电转化法将载体pGREZ-xylA-xks1转入单倍体菌株AS7菌株和AS21菌株,杂交融合成二倍体,获得gre3缺失、表达xylA、xks1的单倍体和二倍体。  缺失gre3基因的单倍体AS7-KA、AS21-KA和二倍体AS7-KA/AS21-KA以及原始菌AS2.489等利用木糖生长、发酵实验,结果①重组菌能在木糖为唯一碳源生长,原始菌株AS2.489基本不长,重组菌木糖利用速率较快②相比原始菌AS2.489,单倍体AS7-KA、AS21-KA和二倍体 AS7-KA/AS21-KA利用木糖效率更高,木糖转化率也提高,副产物木糖醇产率降低,有少量乙醇生成。  利用甲基磺酸乙酯(EMS)对重组酵母进行诱变处理,并在依次在有氧、限氧条件下,利用YPX培养基进行适应性进化、筛选,获得单倍体AS7-KAEAE、AS21-KAEAE和二倍体AS7-KA/AS21-KAEAE,其木糖利用率进一步提高、木糖醇产率进一步降低,乙醇生成增加。
其他文献
学位
实验目的:本课题旨在研究充血性心力衰竭中,用PDTC(核转录因子NF-κB的拮抗剂)干预处理后,在中枢脑组织中炎性细胞因子TNF-a表达情况是否受到影响,以探讨抑制中枢核转录因子N
本实验室前期从西藏Kefir粒中分离得到一株具有高产胞外多糖的马奶酒样乳杆菌ZW3,该菌具有良好的益生功能,在优化的改良MRS培养基中,胞外多糖最高产量达2000mg/L以上,产生的胞外
传统的微生物纯培养技术能够分离得到的微生物仅为自然界中微生物总数的1%左右,绝大多数微生物还处于未培养和未研究状态,针对新型培养技术的探索已经成为了研究热点。本论文
本研究对广州市番禺、康乐和赤岗三地种植的对青枯病抗性的番茄品种益丰、敏感品种益农101的健康和枯萎植株、中抗品种夏红的内生放线菌进行分离、鉴定,并对内生菌分离物产铁
本文通过对荣华二采区10
期刊
我国是一个森林资源贫乏的国家,木材商品供求矛盾十分突出,森林生态服务功能难以满足国土生态安全的需要。遵循森林分类经营原则,利用较少的林地资源,采取集约经营措施,最大限度地
请下载后查看,本文暂不支持在线获取查看简介。 Please download to view, this article does not support online access to view profile.
G蛋白偶联受体(G-protein coupled receptors,GPCRs)是一类具有七次跨膜α螺旋的蛋白超家族,下游信号分子是异源三聚体的 G蛋白,也是最大的蛋白受体超家族之一。GPCRs是一类非常重
为了揭示快慢羽速度差异形成的秘密,寻找控制羽毛发育的基因,本研究选择Bmp2,Shh基因分析在出壳一天快慢羽鸡中翼羽皮肤和翼羽毛囊中的表达情况,来研究这两个基因与羽速性状的相