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目的:建立采用EAM大鼠模型,研究与细胞免疫应答相关的免疫共刺激分子CTLA-4、CD80、CD86,以及与体液免疫相关的抗心肌肌球蛋白抗体,在EAM发生发展过程中的表达及变化,探讨EAM的发病机制。方法:雄性Lewis大鼠随机分为两组:(1)实验组(40只),于实验第1d、第8d分别在大鼠左右后肢足垫皮下注射猪心肌球蛋白和FA混合乳化液各0.1ml,合计猪心肌球蛋白2mg,制备EAM模型,并按初次免疫后第14d、28d、42d、56d不同时间段分成相应亚组;(2)正常对照组(20只),用生理盐水代替猪心肌球蛋白进行注射。于初次免疫后第28、56d对两组大鼠进行心脏超声检测,第14、28、42、56d取各组心脏组织行HE染色观察心肌的病理变化,用免疫组化染色法检测各组大鼠心脏组织CTLA-4、CD80、CD86蛋白的表达,实时荧光定量PCR技术检测心脏心肌CTLA-4、CD80、CD86 mRNA的表达水平,ELISA方法测定血清抗心肌肌球蛋白抗体水平。结果:1、模型制备情况:实验组,死亡5只,建模成功40只。正常对照组,全部存活。2、超声心动图检测:实验组与正常对照组相比,初次免疫后第28d, LVEDD、LVESD明显增加(P<0.05)、LVEF明显降低(P<0.05),并探及心包积液。第56d,LVEDD、LVESD、IVST、LVPWT明显增加(P<0.05)、FS、LVEF明显降低(P<0.05)。心包积液消失,室壁运动减低,心腔扩大。3、心肌组织病理改变:HE染色见正常对照组心肌细胞排列均匀整齐,横纹清楚,细胞大小均一,心肌细胞间隙无变化;实验组大鼠于初次免疫后第14d,开始出现心肌炎改变,表现为组织炎性细胞浸润,伴有心肌细胞肥大变性,相邻细胞间隙增大,排列紊乱,核大深染、异型。第42d,心肌及间质炎性细胞浸润减少,第56d,炎性细胞浸润基本消失,部分心肌细胞断裂,成纤维细胞增生明显。4、免疫组化染色:结果示CTLA-4、CD80、CD86蛋白主要表达于心肌细胞间隙中或心脏包膜下结缔组织区域。实验组各不同时间组的表达均高于正常对照组(P<0.05),其中初次免疫的第14至28d表达呈逐渐增强趋势,而第42至56d表达逐渐减弱(P<0.05)。5、心室心肌CTLA-4、CD80、CD86的mRNA表达:实验组心脏组织CD80、CD86的mRNA表达水平比正常对照组明显增加(P<0.05),并且初次免疫后的第14、28d的表达水平高于第42、56d(P<0.05)。并且28d组CD80、CD86、CTLA-4 mRNA表达水平明显增高,与心脏功能下降水平正相关。6、血清抗心肌肌球蛋白抗体检测:实验组抗体水平明显高于正常对照组(P<0.05),并随病程进展逐步升高,于第42d后开始下降。结论:1、用猪心肌球蛋白免疫大鼠,能制备出EAM模型。2、免疫共刺激分子CD80、CD86、CTLA-4及其mRNA表达,以及抗心肌肌球蛋白抗体的表达增加促进了心脏组织的炎症反应,与实验性自身免疫性心肌炎的发生发展密切相关。