【摘 要】
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目的:研究高迁移率族蛋白B1（high mobility group box 1,HMGB1）参与重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis,SAP）小鼠脾淋巴细胞自噬和凋亡的作用及其分子机制。方法:成年雄性SPF级BALB/C小鼠50只,随机分为对照组、轻症急性胰腺炎（mild acute pancreatitis,MAP）组、SAP组、SAP+抗-HMGB1抗体组（下文
【基金项目】
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广西自然科学基金（2017GXNSFAA198030）,项目名称:高迁移率族蛋白B1对重症急性胰腺炎淋巴细胞自噬与凋亡调控的分子机制； 广西医学高层次骨干人才培养计划资助（桂卫科教发[2018]22号）,项目名称:HMGB1信号通路对SAP淋巴细胞自噬与凋亡的调控机制；
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目的:研究高迁移率族蛋白B1（high mobility group box 1,HMGB1）参与重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis,SAP）小鼠脾淋巴细胞自噬和凋亡的作用及其分子机制。方法:成年雄性SPF级BALB/C小鼠50只,随机分为对照组、轻症急性胰腺炎（mild acute pancreatitis,MAP）组、SAP组、SAP+抗-HMGB1抗体组（下文简写为SAP+Ab组）、SAP+甘草甜素（glycyrrhizin,GL）组。实验前BALB/C小鼠禁食12h,自由饮水。对照组予腹腔注射生理盐水,MAP组采用腹腔注射雨蛙素诱导,SAP组采用腹腔注射雨蛙素和脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导,SAP+Ab组、SAP+GL组于SAP造模成功后分别给予腹腔注射抗-HMGB1抗体、GL。造模后12h取材,取胰腺组织进行HE染色并对胰腺损伤进行评分,紫外分光光度计测定小鼠血清淀粉酶、脂肪酶,ELISA检测小鼠血清HMGB1、Caspase-3和LC3-II表达水平,流式细胞术（flow cytometry,FCM）检测小鼠脾淋巴细胞凋亡率和自噬率,RT-q PCR、Western blot检测脾淋巴细胞HMGB1、Caspase-3、LC3-II、晚期糖基化终产物受体（receptor for advanced glycation end produts,RAGE）、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（phosphorylated p38mitogen activated protein kinase,p-p38 MAPK）等因子mRNA及蛋白表达水平。结果:（1）与对照组相比,MAP组、SAP组、SAP+Ab组和SAP+GL组小鼠胰腺病理组织学评分及HMGB1表达水平增高（P<0.05）;与MAP组相比,SAP组、SAP+Ab组和SAP+GL组小鼠胰腺病理组织学评分及HMGB1表达水平增高（P<0.05）;与SAP组相比,SAP+Ab组和SAP+GL组小鼠胰腺病理组织学评分及HMGB1表达水平呈显著降低（P<0.05）。（2）与对照组相比,MAP组脾淋巴细胞凋亡率和自噬率仅轻微增加（P>0.05）,SAP组、SAP+Ab组和SAP+GL组脾淋巴细胞凋亡率和自噬率则明显增高（P<0.05）;与MAP组相比,SAP组、SAP+Ab组和SAP+GL组脾淋巴细胞凋亡率和自噬率明显增高（P<0.05）;与SAP组相比,SAP+Ab组和SAP+GL组脾淋巴细胞凋亡率和自噬率呈显著降低（P<0.05）。SAP组小鼠HMGB1表达水平与脾淋巴细胞自噬率、凋亡率呈正相关（P<0.05）。（3）与对照组相比,MAP组Caspase-3、LC3-II mRNA及蛋白的表达仅轻微增高（P>0.05）,SAP组、SAP+Ab组和SAP+GL组Caspase-3、LC3-II mRNA及蛋白的表达则明显增高（P<0.05）;与MAP组相比,SAP组、SAP+Ab组和SAP+GL组Caspase-3、LC3-II mRNA及蛋白的表达增高（P<0.05）;与SAP组相比,SAP+Ab组和SAP+GL组Caspase-3、LC3-II mRNA及蛋白的表达呈显著降低（P<0.05）。SAP组小鼠脾淋巴细胞HMGB1 mRNA、脾淋巴细胞HMGB1蛋白、血清HMGB1表达水平分别与脾淋巴细胞LC3-II和Caspase-3 mRNA、脾淋巴细胞LC3-II和Caspase-3蛋白、血清LC3-II和Caspase-3表达水平呈正相关。（4）与对照组相比,MAP组p-p38 MAPK蛋白、RAGE mRNA及蛋白的表达仅轻微增高（P>0.05）,SAP组、SAP+Ab组和SAP+GL组p-p38 MAPK蛋白、RAGE mRNA及蛋白的表达则明显增高（P<0.05）;与MAP组相比,SAP组、SAP+Ab组和SAP+GL组p-p38 MAPK蛋白、RAGE mRNA及蛋白的表达增高（P<0.05）;与SAP组相比,SAP+Ab组和SAP+GL组p-p38 MAPK蛋白、RAGE mRNA及蛋白的表达呈显著降低（P<0.05）。SAP组小鼠脾淋巴细胞HMGB1mRNA、脾淋巴细胞HMGB1蛋白表达水平分别与脾淋巴细胞RAGE mRNA、脾淋巴细胞RAGE和p-p38 MAPK蛋白表达水平呈正相关。结论:（1）急性胰腺炎尤其是SAP小鼠脾淋巴细胞HMGB1表达水平显著上调,淋巴细胞自噬、凋亡增加。（2）HMGB1高表达激活RAGE/p38MAPK信号通路,导致LC3-II、Caspase-3表达水平上调,可能是SAP小鼠脾淋巴细胞自噬、凋亡增加的重要原因。抑制HMGB1表达可逆转上述作用,改善胰腺损伤,HMGB1可能作为SAP治疗的潜在靶点。
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