芽孢杆菌制剂对大肠杆菌感染仔猪免疫应答及肠道菌群影响

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目的:益生菌芽孢杆菌已被用于预防断奶仔猪腹泻,但芽孢杆菌调节宿主肠道健康机制尚不明确,尤其是在我国逐渐推广的大肠杆菌F4受体阴性猪上。适度的机体免疫应答及稳定的肠道微生物菌群能抵御致病菌感染。本研究的目的是通过比较不同剂量枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)与地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)混合制剂对肠道菌群多样性影响及其免疫调控效应,探究芽孢杆菌制剂对受体阴性断奶仔猪F4+产肠毒素大肠杆菌(F4+Enterotoxigenic Escherichia coli,F4+ETEC)感染的预防机制。方法:32头21日龄断奶F4受体阴性仔猪随机分为4组,每组8头:1)CONT:第1-8天每天连续灌服10mL无菌生理盐水;2)ETEC:第一周每天连续灌服10mL无菌生理盐水,第8天灌服10mL浓度为10×109CFU/mL的F4+ETEC;3)LDBE:第一周连续灌服溶解于10mL生理盐水的低剂量芽孢杆菌制剂(3.9×107CFU/mL),第8天灌服与ETEC组等量F4+ETEC;4)HDBE:第一周连续灌服溶解于10mL生理盐水的高剂量芽孢杆菌制剂(78×107CFU/mL),第8天灌服与ETEC组等量F4+ETEC。第15天,仔猪全部屠宰。记录采食量、体重及直肠温度。通过平板计数和高通量DNA测序方法分析粪样及肠段内容物菌群结构多样性;H&E染色分析空肠及回肠炎症程度;血液样品进行血常规检查,ELISA检测血清中IL-10及TNF-a的浓度。结果:高、低剂量芽孢杆菌制剂均显著抑制F4+ETEC引起的仔猪采食量下降。低剂量芽孢杆菌制剂显著抑制F4+ETEC引起的粗蛋白质和总能消化率的下降,同时显著减缓F4+ETEC引发的发热及空肠肠炎。高、低剂量芽孢杆菌制剂明显抑制F4+ETEC感染后12,48,96及144h引起的杆状核嗜中性粒细胞升高。感染后6h,高剂量芽孢杆菌制剂显著抑制F4+ETEC引起的血清TNF-α浓度升高。低剂量芽孢杆菌制剂在感染后12h显著抑制F4+ETEC引起的血清IL-10浓度下降。相比于F4+ETEC,高剂量芽孢杆菌制剂显著升高第9天粪样中乳酸杆菌及双歧杆菌的数量,而低剂量芽孢杆菌制剂在第12天显著升高粪样中乳酸杆菌的数量。第12天高剂量芽孢杆菌制剂组仔猪粪样肠杆菌的数量显著低于其他三组。高、低剂量芽孢杆菌制剂在12天显著降低粪样中肠球菌的数量。与F4+ETEC相比,高剂量芽孢杆菌制剂显著升高了盲肠、结肠中乳酸杆菌数量,而低剂量芽孢杆菌制剂仅升高结肠中乳酸杆菌的数量。相比于对照组及ETEC组,高、低剂量芽孢杆菌制剂组仔猪在回肠、盲肠及结肠中有更高的双歧杆菌和更低的肠杆菌数量。结论:高、低剂量芽孢杆菌制剂均可以缓解F4+ETEC引起的F4受体阴性仔猪生长性能下降,但仅低剂量芽孢杆菌制剂抑制养分消化率的降低,同时减轻F4+ETEC引起的发热及肠炎。高剂量芽孢杆菌制剂对调节菌群平衡更有效,但影响机体免疫应答,增加了断奶仔猪发生感染性肠炎的风险。
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