单纯疱疹病毒Ⅱ型（HSV-2）是最常见的性传播病原体之一。HSV-2主要感染生殖系统黏膜上皮,并在阴道角质形成细胞内复制,可通过周围神经轴突传至骶神经节在中枢神经系统建立终身潜伏感染和周期性再激活。HSV-2感染会使人类免疫缺陷病毒的感染风险增加三倍以上。HSV-2也可以引起新生儿致死性脑炎。目前抗病毒治疗常用于控制HSV-2的再激活,并不能彻底消除病毒。现阶段尚无有效的预防性或治疗性疫苗。以往对于HSV-2的研究,大多采用癌细胞系或者永生化细胞系,这些细胞因遗传背景和表型的改变而失去正常细胞生理功能。应用动物模型的研究结果由于种属差异导致很难直接进行临床应用。人生殖道粘膜上皮是HSV-2原发感染部位和自然宿主,因此,建立人源正常细胞模型对HSV-2病毒生物学研究和抗病毒新药发现具有重要意义。从人体组织直接分离和长期培养人正常细胞在几十年来一直是非常具有挑战性的,因为原代正常细胞在到达复制衰老M1期或凋亡危机M2期后就会衰老凋亡,停止分裂。最近,条件重编程（condition reprogramming,CR）技术的发明,通过ROCK抑制剂以及小鼠成纤维细胞共培养系统,可以有效地使人原代上皮细胞在体外长期培养,而且不导入任何外源基因,建立的条件重编程细胞（conditionally reprogrammed cells,CRC）能保持细胞原有的表型和遗传学背景以及定向谱系分化的能力。前期研究,我们利用条件重编程技术成功分离建立了人正常阴道上皮细胞（human normal vaginal epithelial cells,HNVEC）,鉴定了HNVEC细胞是一株具有正常细胞生物学功能的全新细胞株。本研究首先建立了人源正常细胞HNVEC的HSV-2感染2D模型,同时以h TERT基因永生化细胞系HCE作为对照细胞模型。通过细胞形态学观察、包膜糖蛋白g B免疫荧光、Q-PCR检测病毒相关基因g B和UL-30的m RNA表达以及病毒空斑实验（plaque assay）,结果显示HNVEC细胞比HCE细胞对HSV-2更敏感,病毒在HNVEC细胞中复制速度更快。接下来,利用阿昔洛韦作为阳性对照药物,建立了基于人源正常细胞HNVEC的抗HSV-2的药物筛选2D模型。阿昔洛韦在HNVEC细胞模型上可以抑制HSV-2复制,但是仍能在m RNA水平检测到g B和UL-30表达,在细胞上清中可检测到少量具有感染活性的病毒。而在HCE细胞模型上阿昔洛韦则完全抑制HSV-2的复制和增殖。结果显示,HSV-2感染人源正常细胞HNVEC的药物作用模型更加接近阿昔洛韦临床用药情况。我们欲通过研究病毒-宿主相互作用,探讨关键宿主蛋白分子能否作为抗病毒治疗靶点。因此,我们选取另外3种药物或小分子抑制剂,应用人源正常细胞HNVEC药物筛选模型,进行了抗病毒作用效果的评估,发现PAA和TAK-242具有良好的抗病毒效果,有望成为新的抗HSV-2治疗药物;ku-55933则具有较弱的抗病毒效果。实验结果也进一步表明,人源正常细胞HNVEC的HSV-2感染模型的稳定性和研究结果的一致性。前期研究我们通过3D气-液界面（air-liquid interface,ALI）培养,利用HNVEC细胞构建成能够模拟体内微环境的极化阴道上皮3D模型,在此基础上,我们从该3D模型顶端面接种HSV-2,在一定的感染周期内模拟重现了体内HSV-2感染的病理进程,初步建立了基于HNVEC细胞抗HSV-2药物筛选3D模型。应用该3D模型初步评价了阿昔洛韦和PAA抗病毒效果,结果表明阿昔洛韦具有较好抗病毒作用,可完全保护3D极化复层上皮结构的完整性;PAA在一定程度上可抑制HSV-2复制增殖。基于人源正常细胞的2D和3D病毒感染模型能够克服细胞模型和动物模型在HSV-2研究上的局限性,为研究HSV-2在自然宿主的复制增殖、与宿主的相互作用、抗病毒药物及疫苗研发等方面提供一个全新的模型。