【摘 要】
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目的:本研究拟探索和鉴定去势抵抗性前列腺癌（CRPC）发生和发展中的关键基因,将为CRPC诊断和预后的特异性分子标记物的发现提供新的思路,同时也为CRPC的治疗提供新的靶点和策略。方法:本研究采用生物信息学的手段对比分析了GEO数据库和其他相关的数据库,发现II型环腺苷酸依赖性蛋白激酶（PRKAR2B）可能在CRPC中发挥着重要功能。应用免疫组织化学（IHC）检测PRKAR2B在CRPC组织中的表
【基金项目】
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国家自然科学基金课题（81572536,81672850）；
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目的:本研究拟探索和鉴定去势抵抗性前列腺癌（CRPC）发生和发展中的关键基因,将为CRPC诊断和预后的特异性分子标记物的发现提供新的思路,同时也为CRPC的治疗提供新的靶点和策略。方法:本研究采用生物信息学的手段对比分析了GEO数据库和其他相关的数据库,发现II型环腺苷酸依赖性蛋白激酶（PRKAR2B）可能在CRPC中发挥着重要功能。应用免疫组织化学（IHC）检测PRKAR2B在CRPC组织中的表达和定位,结合si RNA干扰与过表达重组质粒转染技术调节PRKAR2B的表达以检测其对CRPC细胞的增殖、侵袭和凋亡的影响。最后通过全基因组转录组分析和GO富集分析,同时鉴定了PRKAR2B在CRPC细胞中参与调节的主要生物学过程以及它所调控的下游基因。结果:（1）利用差异表达基因分析以及Oncomine分析发现PRKAR2B基因可能是一个对CRPC的发展特别重要的潜在基因。（2）在IHC研究中发现PRKAR2B的表达主要位于前列腺上皮细胞胞浆;正常前列腺组织与前列腺癌组织、CRPC与去势敏感性前列腺组织中的PRKAR2B表达存在显著差异（P＜0.01）;Gleason≤6、Gleason 7及Gleason≥8前列腺肿瘤组织PRKAR2B表达存在显著差异（P＜0.05）。（3）利用si RNA干扰和过表达重组质粒技术调节PRKAR2B在在前列腺癌细胞中的表达水平发现,PRKAR2B基因可促进CRPC细胞的增殖、侵袭,抑制肿瘤细胞的凋亡。（4）使用si RNA干扰技术在DU145细胞中敲除PRKAR2B后,检测DU145细胞内有385个特异表达的基因,信号通路分析发现,PRKAR2B和细胞周期以及细胞增殖具有强相关性。在DU145细胞中,PRKAR2B被敲除后,MCM2（mini-chromosome maintenance complex component 2）、PLK1（polo like kinase 1）、AURKB（aurora kinase B）和CCNB1（cyclin B1）的表达明显下降;同时,在22RV1中过表达PRKAR2B导致MCM2、PLK1、AURKB和CCNB1的表达上调。这提示MCM2、PLK1、AURKB和CCNB1这些细胞周期网络结点基因可能是PRKAR2B介导CRPC发生发展的关键下游基因。结论:PRKAR2B在CRPC组织中的表达显著高于去势敏感性前列腺癌组织和正常前列腺组织,且表达强度随着肿瘤恶性程度的增加而增强。PRKAR2B在CRPC细胞系中高表达并且能够促进细胞增殖、侵袭,抑制细胞的凋亡。全基因组表达谱的分析结果表明PRKAR2B在CRPC细胞系中主要参与调控细胞周期和细胞分裂相关基因的表达,比如MCM2、PLK1、AURKB和CCNB1基因。
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