论文部分内容阅读
第一部分纳米脂质微泡超声造影剂的制备目的:通过冷冻干燥法、机械振荡法和生物素-亲和素连接法制备非靶向纳米微泡(N-NBs)及卵巢癌靶向的促黄体生成素释放激素(LHRH)-纳米微泡(LHRH-NBs)。方法:将二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)/生物素化二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG(2000)Biotin)、甘油及PBS等按一定比例混合均匀,通过冷冻干燥法及机械振荡法制备非靶向纳米脂质微泡超声造影剂/生物素化非靶向纳米脂质微泡超声造影剂。利用生物素-亲和素连接法将生物素化的促黄体生成素释放激素(luteinzing hormone-releasing hormone,LHRH)抗体连接于生物素化的纳米脂质超声造影剂,即制成LHRH-靶向纳米超声造影剂。结果:成功制备出N-NBs及LHRH-NBs两种纳米超声造影剂,两种微泡的外观圆整,分布均匀,非靶向纳米微泡及LHRH-靶向纳米微泡粒径分别集中于360nm、500nm,室温下可保存7d。结论:通过冷冻干燥法、机械振荡法和生物素-亲和素连接法,可成功制备出N-NBs及LHRH-NBs两种纳米微泡且两种纳米微泡粒径小、稳定性高。第二部分纳米微泡在裸鼠移植瘤中显影目的:观察N-NBs、LHRH-NBs两种纳米微泡造影剂在裸鼠卵巢癌(OVCAR-3)移植瘤模型体内显影情况。方法:将裸鼠卵巢癌移植瘤模型随机分成3组(每组10只),经尾静脉分别注入N-NBs、LHRH-NBs及声诺维,观察三种造影剂在卵巢癌组织中的显影情况。结果:LHRH-NBs与N-NBs相比,其显影强度及显影持续时间均无统计学差异(P>0.05);LHRH-NBs、N-NBs分别与声诺维比较,显影强度均无统计学差异(P>0.05),但持续显影时间均长于声诺维,差异有统计学意义(P<0.001)。结论:LHRH-NBs、N-NBs显影能力与声诺维相当,但持续显影时间较长。第三部分纳米微泡通过肿瘤组织内皮间隙及与细胞结合实验目的:荧光显微镜观察N-NBs、LHRH-NBs两种纳米微泡穿过血管内皮间隙情况;免疫荧光观察N-NBs、LHRH-NBs穿过血管内皮间隙与肿瘤细胞的结合情况。方法:将Di I标记N-NBs、LHRH-NBs两种纳米微泡经尾静脉注入显影后处死荷瘤裸鼠,立即取出肿瘤制成5μm冰冻切片,倒置荧光显微镜直接观察被Di I标记纳米微泡穿过血管内皮情况;实验组和对照组分别将LHRH-NBs、N-NBs经尾静脉注入裸鼠体内,显影后取出肿瘤组织制成5μm冰冻切片行免疫荧光观察;空白组直接取肿瘤组织制成5μm冰冻切片,按常规免疫荧光法步骤进行荧光观察。结果:LHRH-NBs与N-NBs均能够通过血管内皮间隙;LHRH-NBs通过血管内皮间隙后能与肿瘤细胞靶向结合。结论:自制纳米造影剂均能够通过血管内皮间隙且LHRH-NBs能与卵巢癌细胞靶向结合。