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目的:研究宫颈癌细胞系中Stat3、p-Stat3、Cyclin D1与Survivin蛋白的表达,及p-Stat3与CyclinD1、Survivin表达的关系,应用该通路的特异性阻滞剂AG490作用于宫颈癌细胞系,观察其对宫颈癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响,检测JAK2、p-Stat3、Stat3蛋白表达及与下游靶基因产物CyclinD1、Survivin蛋白表达的关系,探讨Stat3信号传导通路在宫颈癌发生发展中的调控机制,寻找宫颈癌早期诊治的标志物,进一步分析通过药物阻断Stat3信号通路在治疗宫颈癌中的作用。方法:1.对人宫颈癌细胞系Hela细胞进行体外培养。2.采用Western-blot技术检测宫颈癌细胞系中Stat3、p-Stat3蛋白及其下游靶基因产物CyclinD1、Survivin蛋白的表达。3.用不同浓度AG490处理Hela细胞,作为实验组,将加入无血清培养基的Hela细胞作为对照组,同时设不接种细胞的空白对照组。4.MTT法检测不同浓度(25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L)AG490对Hela细胞作用24h、48h及72h后细胞的增殖情况。5.流式细胞技术检测加入25μmol/L、50μmol/L、100μmol/LAG490作用48h后细胞周期的变化。6.流式细胞技术检测加入25μmol/L、50μmol/L、100μmol/LAG490对Hela细胞作用24h、48h及72h后细胞的凋亡情况。7.Western Blot法检测25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L AG490作用48h后,Hela细胞JAK2、Stat3、p-Stat3表达情况及下游靶基因产物细胞周期素(CyclinD1)及生存素(Survivin)的表达水平,并分析p-Stat3与CyclinD1及Survivin表达的相关性。结果:1.宫颈癌细胞系Hela细胞中存在着组成性激活的Stat3信号。2.p-Stat3与CyclinD1及Survivin表达趋势一致。3.Hela细胞经AG490处理后,细胞增殖水平下降,有浓度依赖效应。AG490处理后48小时,各浓度组与对照组比较有统计学差异(P＜0.01)。AG490加入浓度在25μmol/L～100μmol/L范围内时,AG490浓度越高,其对Hela细胞增殖抑制效应越强(P＜0.05)。对AG490处理Hela细胞不同时间长度后细胞增殖状态的检测表明,25μmol/L AG490处NHela细胞24小时就开始表现出增殖抑制效应,72小时后表现出明显的抑制效应,细胞生存率持续下降(P＜0.05),有时间依赖性。4.阻断Stat3信号传导通路使宫颈癌细胞系细胞周期阻滞。50μmol/L AG490作用细胞48h后G0/G1期从(65.37±1.1 8)%上升至(74.67±3.13)%(P＜0.05),S期从(22.54±0.78)%下降至(17.45±1.45)%(P＜0.05),细胞基本阻滞于G0/G1期。同时,AG490对Hela细胞周期的阻滞作用有剂量依赖性。5.AG490促进宫颈癌细胞系凋亡。25umol/L AG490作用于Hela细胞24h后,流式细胞检测结果显示细胞凋亡率为(8.43±2.57)%。25μmol/L、50μmol/L、100μmol/LAG490处理Hela细胞48h后,凋亡率分别为(13.58±1.42)%,(23.44±1.55)%,(31.05±2.09)%,与对照组检测结果(2.99±0.75)%比较有统计学差异(P＜0.05),且各浓度组之间比较有统计学差异(F=131.15,P＜0.05),表明AG490促进Hela细胞凋亡并有浓度依赖效应。6.不同浓度AG490处理细胞后,Western blot检测发现各处理组JAK2及p-Stat3蛋白表达水平降低(P＜0.05),Stat3蛋白表达与对照组之间变化不大(P＞0.05)。7.不同浓度AG490作用于Hela细胞后Stat3信号通路下游靶基因产物CyclinD1及Survivin表达下调。经Pearson’s相关性分析显示,在宫颈癌细胞中p-Stat3与CyclinD1及Survivin表达呈线性相关(r=0.901,P＜0.01;r=0.844,P＜0.01),提示CyclinD1及Survivin作为STAT3信号转导通路的重要下游基因产物,参与了Hela细胞的细胞周期、增殖及凋亡的调控。结论:1.从蛋白水平证实宫颈癌中存在着组成性激活的Stat3信号通路。2.AG490可以特异地阻断Hela细胞中组成性激活的Stat3信号通路。3.AG490阻断Stat3转导通路后,宫颈癌细胞系Hela细胞的G0/G1期比例明显增高,S期细胞比率降低,细胞周期阻滞,细胞的增殖水平显著下降,该效应主要是通过调节Stat3信号通路下游靶基因产物CyclinD1来实现。4.AG490能够抑制宫颈癌细胞的增殖,促进细胞凋亡,主要是通过下调Stat3信号通路下游产物Survivin来实现。5.AG490可使JAK2,p-Stat3及下游靶基因产物CyclinD1、Survivin表达下调,同时p-Stat3与CyclinD1及Survivin表达呈正相关。6.Stat3信号转导通路通过调控下游靶基因产物CyclinD1、Survivin来促进人宫颈癌细胞系的细胞周期进行,加快细胞增殖,抑制细胞凋亡,参与宫颈癌的发生发展,通过阻断该通路来进行分子靶向治疗。7.p-Stat3蛋白可作为宫颈癌早期诊断、观察病情的一种生物学指标。