【摘 要】
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背景先天性腭裂是我国常见的出生缺陷疾病,全反式维甲酸诱导小鼠腭裂模型是研究该疾病常用的实验动物研究模型,腭突间质细胞凋亡导致的腭组织量不足可能是腭裂发生的机制之一,烟酰胺具有预防细胞凋亡的作用,关于烟酰胺是否能够预防腭裂的研究尚无报道。目的探索烟酰胺对全反式维甲酸诱导腭裂的预防作用,对其产生预防作用的可能机制进行初步探讨。材料与方法采用梯度浓度的烟酰胺对全反式维甲酸诱导的腭裂动物模型进行干预,随机
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背景先天性腭裂是我国常见的出生缺陷疾病,全反式维甲酸诱导小鼠腭裂模型是研究该疾病常用的实验动物研究模型,腭突间质细胞凋亡导致的腭组织量不足可能是腭裂发生的机制之一,烟酰胺具有预防细胞凋亡的作用,关于烟酰胺是否能够预防腭裂的研究尚无报道。目的探索烟酰胺对全反式维甲酸诱导腭裂的预防作用,对其产生预防作用的可能机制进行初步探讨。材料与方法采用梯度浓度的烟酰胺对全反式维甲酸诱导的腭裂动物模型进行干预,随机分为8组:第一组为NAM 0mg/kg+RA 0mg/kg组;第二组为NAM 10mg/kg+RA 0mg/kg组;第三组为NAM 20mg/kg+RA 0mg/kg组;第四组为NAM 40mg/kg+RA 0mg/kg组;第五组为NAM 0mg/kg+RA 70mg/kg组;第六组为NAM 10mg/kg+RA 70mg/k组;第七组为NAM20mg/kg+RA70mg/kg组;第八组为NAM 40mg/kg+RA70mg/kg组。每组5只昆明孕鼠,于E8.5-13.5天采用烟酰胺灌胃处理,于E10.5天烟酰胺灌胃1小时后采用全反式维甲酸灌胃处理,阴性对照采用相同剂量PBS液和玉米油灌胃处理。观察统计各组胎鼠腭裂的情况,并筛选烟酰胺具有预防作用的最佳浓度。采用Annexin V-FITC/PI双染色法对MEPM进行分组干预,共分4组:CONTROL组、NAM 200μmol/L组、RA 1μmol/L组、NAM 200μmol/L+RA 1μmol/L组。各组药物干预24小时后进行细胞凋亡检测,卡方检验比较凋亡率。检测烟酰胺预防腭裂动物模型其最佳浓度下的腭组织中内源性凋亡通路关键酶CASPASE 9的活性。具体分组为:CONTROL组、NAM 20mg/kg+RA 0 mg/kg组、NAM 20mg/kg+RA70 mg/kg、NAM 20 mg/kg+RA70 mg/kg组,通过方差分析比较CASPASE 9活性变化率。结果NAM 10mg/kg可以将RA 70mg/kg诱导的昆明小鼠腭裂率从阳性对照组的92.7%下调至85%（P＞0.05）,不具有统计学差异;NAM 20mg/kg可以将腭裂率下调至38.1%（P＜0.01）;NAM 40mg/kg可以将腭裂率下调至68.9%（P＜0.01）;NAM 10、20、40mg/kg均未导致腭裂及明显的胎鼠畸形发生。Annexin V-FITC/PI双染色法细胞凋亡检测结果:CONTROL组细胞凋亡率为16.53±2.89%,RA 1μmol/L组细胞凋亡率为22.9±1.85%,凋亡率上升（P＜0.01）;NAM 200μmol/L组细胞凋亡率9.23±1.39%,凋亡率明显下降（P＜0.01）;与RA 1μmol/L组相比较,NAM200μmol/L+RA 1μmol/L组细胞凋亡率为14.9±7.67%,凋亡率明显下降（P＜0.01）。CASPASE 9的活性检测结果:CONTROL组活性百分比为100%,NAM 20mg/kg组CASPASE 9活性百分比为71.16±0.53%（P＜0.01）;RA 70mg/kg组腭突组织中CASPASE 9的活性百分比为115.69±2.22%（P＜0.01）;NAM 20mg/kg+RA 70mg/kg腭突组织中CASPASE 9活性活性百分比为109.77±2.77%（与RA 70mg/kg组相比较,P＜0.05）。结论烟酰胺对全反式维甲酸诱导昆明小鼠胎鼠腭裂的产生具有预防作用,烟酰胺通过灌胃途径产生对全反式维甲酸诱导昆明小鼠胎鼠腭裂预防作用的有效浓度为20mg/kg和40mg/kg。烟酰胺预防全反式维甲酸诱导昆明小鼠腭裂的机制可能与内源性凋亡相关。
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