背景与目的根据2022年中国最新癌症数据,我国食管癌每年新发病例25.3万,为第六高发的恶性肿瘤类型,死亡率高居第五位,死亡病例为19.4万。食管癌根据组织学特点主要分为食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）和食管腺癌（esophageal adenocarcinoma,EAC）,我国食管鳞状细胞癌占比高达90%以上。位于闽粤交界处的潮汕地区,特别是南澳岛,是我国食管癌高发区之一。食管癌发病隐匿,患者出现吞咽困难症状就诊时基本已进展至中晚期,治疗效果和生活质量大幅降低,因此探索食管癌发生发展的危险因素对于食管癌的防治起到关键性作用。癌症的演变是一个多因素影响、多步骤渐进的过程,除了宿主遗传易感性和环境暴露等因素外,微生物的致癌促癌作用日益受到关注。课题组前期通过宏基因组测序及16srRNA测序对食管癌变相关微生物进行筛选,发现在食管癌变过程中菌群结构发生变化,中间普氏菌的丰度逐渐上升,提示中间普氏菌可能通过感染食管上皮发挥致癌促癌作用。中间普氏菌为革兰氏阴性绝对厌氧菌,与慢性牙周炎、急性坏死性牙龈炎、坏疽性口炎、妊娠期牙龈炎等炎性疾病密切相关,而中间普氏菌与食管癌的相关研究鲜有报道,本研究拟通过中间普氏菌与食管鳞癌细胞体外共培养实验,初步探索中间普氏菌对食管鳞癌细胞系的黏附、侵袭作用及其对细胞超微结构的影响,通过转录组测序分析细胞转录水平变化,为后续在分子生物学水平研究中间普氏菌感染与食管癌发生发展之间的关系提供理论基础。材料与方法实验材料（1）细菌样本:中间普氏菌标准菌株（ATCC25611）购自广东省微生物菌种保藏中心;（2）细胞样本:人食管鳞癌细胞株KYSE150、KYSE520购自上海吉凯基因生物技术公司,食管永生化细胞系NE6为香港大学曹世华教授馈赠。方法（1）扫描电镜和透射电镜:用于观察中间普氏菌对食管鳞癌细胞系的黏附、侵袭情况以及细胞超微结构改变情况。（2）免疫荧光:用于检测中间普氏菌感染后食管鳞癌细胞8-OHdG、γ-H2AX、NF-κB p65蛋白的表达情况。（3）CCK8:用于检测中间普氏菌感染后食管鳞癌细胞增殖活力变化情况。（4）转录组学测序:用于检测中间普氏菌感染对食管鳞癌细胞基因转录水平影响,筛选差异表达基因,分析受影响的主要分子信号通路。结果（1）通过中间普氏菌与食管鳞癌细胞共培养,由扫描电镜和透射电镜发现,中间普氏菌可黏附于细胞表面,进一步导致胞膜内陷,接着细菌可完全侵入细胞内,并且能够分裂增殖;宿主细胞可见细胞膜孔洞形成、微绒毛稀疏、细胞胞质空泡形成、线粒体肿胀和嵴型改变。（2）通过将中间普氏菌与食管鳞癌细胞共培养,观察到共培养感染组细胞8-OHdG入核表达;γ-H2AX表达上调,由核内散在表达变为灶状表达。中间普氏菌对食管鳞癌细胞的增殖活力无明显影响。（3）转录组测序发现中间普氏菌感染后食管癌细胞差异表达基因共有517个,通过KEGG分析后发现可显著富集到NF-κB信号通路,免疫荧光发现中间普氏菌感染后食管鳞癌细胞NF-κB p65分子入核表达。结论中间普氏菌感染食管鳞癌细胞后能黏附和侵入细胞,并在胞内分裂增殖,引起细胞形态及超微结构的损伤性改变。