【摘 要】
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目的:观察姜黄素通过下调PFKFB3的表达影响Ang-Ⅱ诱导的VSMC增殖和迁移。方法:首先检测Ang-Ⅱ对VSMC细胞活性、迁移能力及PFKFB3蛋白表达的影响。然后用PFKFB3蛋白特异性抑制剂3PO预处理VSMC 24h后,再用Ang-Ⅱ处理细胞,检测PFKFB3蛋白表达,细胞内2,6二磷酸果糖及细胞上清乳酸含量变化,细胞活性、细胞存活率及细胞迁移能力的影响。接着用姜黄素不同浓度预处理VSM
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目的:观察姜黄素通过下调PFKFB3的表达影响Ang-Ⅱ诱导的VSMC增殖和迁移。方法:首先检测Ang-Ⅱ对VSMC细胞活性、迁移能力及PFKFB3蛋白表达的影响。然后用PFKFB3蛋白特异性抑制剂3PO预处理VSMC 24h后,再用Ang-Ⅱ处理细胞,检测PFKFB3蛋白表达,细胞内2,6二磷酸果糖及细胞上清乳酸含量变化,细胞活性、细胞存活率及细胞迁移能力的影响。接着用姜黄素不同浓度预处理VSMC 1h后,加入Ang-Ⅱ进行孵育,观察细胞活性及细胞内PFKFB3蛋白表达,确定姜黄素作用的最佳浓度。最后姜黄素的最佳浓度预处理VSMC1h后,加入Ang-Ⅱ进行孵育,检测细胞中PFKFB3蛋白的表达,细胞内2,6二磷酸果糖及细胞上清乳酸含量变化,细胞活性、生存率及细胞迁移能力的影响。其中用Western-blot技术检测PFKFB3蛋白表达,酶联免疫试剂盒测定细胞内2,6二磷酸果糖及细胞上清乳酸的含量,用MTT法、CCK-8法测定细胞活性,BrdU法测定细胞存活率,划痕实验检测细胞迁移能力。结果:Ang-Ⅱ通过增加VSMC中PFKFB3蛋白的表达,引起细胞中2,6二磷酸果糖含量增加,细胞糖酵解增加,最终使得细胞能量代谢上调从而引起细胞增殖,迁移增加。PFKFB3特异性抑制剂3PO可使Ang-Ⅱ诱导的VSMC中PFKFB3的含量明显下降,能抑制Ang-Ⅱ诱导的VSMC的增殖与迁移。姜黄素能明显降低Ang-Ⅱ诱导的VSMC中PFKFB3蛋白的表达,使得2,6二磷酸果糖的含量降低,从而抑制糖酵解,导致VSMC的细胞增殖活性及细胞迁移能力明显下降。结论:PFKFB3在Ang-Ⅱ诱导的VSMC增殖和迁移起关键作用。姜黄素通过影响PFKFB3蛋白的表达抑制Ang-Ⅱ诱导的VSMC的增殖与迁移。
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