目的:鸡蛋过敏是一种广泛存在的疾病,主要影响儿童,而卵类黏蛋白是最重要的鸡蛋过敏原。过敏原表位尤其是线性表位在食物过敏中发挥重要作用。本研究以卵类黏蛋白为研究对象,通过建立可用于食物过敏原线性表位筛选的ELISA方法,解析其线性表位谱,比较儿童及成人表位识别差异,并分析表位s Ig E抗体异质性与临床表现的关系,进一步完善我们对表位的认识和理解。方法:1.食物过敏原线性表位筛选方法的建立利用生物素-链酶亲和素相互作用,制备生物素化牛血清白蛋白-链酶亲和素通用酶标反应板,加入生物素化过敏原表位多肽作为包被抗原,再加入待检血清和HRP标记的羊抗人Ig E抗体充分反应,形成表位抗原-特异性Ig E抗体-HRP标记的羊抗人Ig E抗体复合物,建立一种抗原间接包被的液相酶联免疫方法。根据已报道的卵类黏蛋白表位研究结果,合成相关线性表位肽,以鸡蛋过敏患者混合血清（P）及健康对照混合血清（N）作为待检抗体,分别检测其A₄₅₀,通过选择A_P/A_N最大比值时的实验条件,优化生物素化牛血清白蛋白包被浓度及包被条件、封闭液、生物素化抗原表位浓度、血清稀释度及孵育条件、酶标二抗工作浓度,检测血清中的表位s Ig E抗体。并通过敏感性及重复性试验评估该方法的可行性。2.卵类粘蛋白线性表位解析及其应用研究收集鸡蛋过敏及非鸡蛋过敏患者血清,利用上述建立方法,在最适条件下检测卵类黏蛋白表位特异性Ig E抗体水平,分析各个表位的反应频率,比较儿童及成人识别表位特征的差异,研究表位s Ig E抗体异质性,并通过嗜碱性粒细胞激活试验和RBL-2H3细胞β-己糖胺酶释放试验验证表位s Ig E抗体异质性与临床表现的关系。结果:1.成功构建了可用于食物过敏原线性表位检测的间接ELISA方法。优化反应条件可知BSA-Bio最适包被浓度为1μg/m L,包被条件为4°C过夜。最适封闭液为1%BSA。抗原肽最适浓度为5μg/m L。血清样本1:20稀释,37°C反应2 h,结果最佳。酶标二抗1:2000稀释,效果最佳。该方法敏感性较高;批内及批间变异系数均低于10%,重复性好,适用于卵类黏蛋白线性表位研究。2.一共合成8条卵类黏蛋白相关线性表位多肽,其中4条多肽（AA1-10,AA9-20,AA101-114,AA113-124）的反应频率高于50%。AA31-44与AA175-186反应频率最低。85%的患者至少识别其中一种多肽,而15%的患者不识别任何一条多肽,并且有24%的患者可识别所有多肽。成人比儿童表现出更强烈,更频繁的过敏原及表位识别。儿童对卵类黏蛋白的反应频率为60%,而成人为78%。儿童每条肽阳性率均低于50%,而成人均高于50%。在成人中,主要识别AA1-10,AA9-20,AA101-114,儿童则对多个表位（AA1-10,AA9-20,AA46-59,AA91-104,AA101-114,AA113-124）显示相似的反应强度。成人识别表位数量的平均值也高于儿童。有多系统过敏症状的患者所识别的抗原表位数量多于仅出现皮肤症状的患者,表位s Ig E抗体异质性可能作为症状严重程度的标记物。嗜碱性粒细胞激活试验及β-己糖胺酶释放试验证实了表位识别数量多的血清可更有效地诱导效应细胞反应。结论:1.通过制备生物素化牛血清白蛋白-链酶亲和素酶标反应板,初步建立了可用于食物过敏原线性表位筛查的间接ELISA方法,该方法较敏感且重复性好。2.鉴定了四个重要的卵类黏蛋白表位:AA1-10,AA9-20,AA101-114,AA113-124。儿童及成人表位识别特征存在差异。表位s Ig E抗体异质性强度可作为症状严重程度的标记物,预测疾病程度及耐受发展。