研究背景原发性肝癌(primary hepatocellular carcinoma, PHC)是临床上常见的恶性肿瘤之一,其全球发病率逐年增长,已超过62.6万/年,位居最常见恶性肿瘤发病率的第5位；死亡接近60万/年,位居恶性肿瘤相关死亡的第3位。肝癌在我国高发,目前我国发病人数约占全球的55%,在恶性肿瘤相关死亡中位居第2位。由此可见,肝癌严重威胁我国人民的生命健康和国民经济的发展。我国肝癌发病的主要病因是病毒性肝炎,如乙型、丙型病毒性肝炎；黄曲霉毒素、酒精性肝硬化等也是我国肝癌发病的重要原因。肝癌按病理学类型主要分为肝细胞性肝癌、胆管上皮细胞性肝癌和混合细胞性肝癌。我国肝癌的主要病理类型为肝细胞肝癌(以下简称肝癌),约占全部肝癌发病率的90%。目前肝癌的治疗手段主要有外科治疗(如肿瘤切除术、肝脏移植术)和非外科治疗(动脉化疗栓塞、局部射频消融、免疫治疗及分子靶向治疗等)。由于肝癌发病较为隐匿,早期肝癌患者往往无任何症状,因此多数患者确诊时已属中晚期,失去手术切除的机会。目前经导管肝动脉化疗栓塞(transcatheter arterial chemoembolization, TACE)已成为无手术指征中晚期原发性肝癌及不愿手术肝癌患者的首选治疗方法,但是其疗效、术后复发率、远期生存率仍不令人满意,且TACE术后患者免疫功能下降,更易导致肿瘤的复发及转移。因此,如何提高TACE术后的疗效和生存质量,降低肝癌患者的复发及阻遏其远处转移,成为目前临床上亟需解决的问题。随着肿瘤免疫学等学科的快速发展及临床免疫治疗研究的深入,免疫治疗已成为继手术、放疗、化疗、分子靶向治疗等之后的一种新的治疗方法。CIK细胞(cytokine induced killer cells)是细胞因子诱导的杀伤细胞,是一种新型免疫活性细胞,它是自体外周血单个核细胞,在体外经多种细胞因子共同诱导培养后产生的一类CD3+、CD56+双阳性的细胞毒性杀伤细胞。CIK细胞回输后可通过多种途径实现抗肿瘤效应。树突状细胞(dendritic cells, DC)是人体内最强的抗原递呈细胞,能摄取、加工和递呈抗原,将抗原信息传递给T淋巴细胞,从而引发机体的一系列特异性免疫应答。CIK细胞在与DC细胞共同培养条件下,细胞上清液中IFN-γ、IL-2等细胞因子的分泌量比相同条件下单纯CIK细胞分泌高；且共同培养的DC-CIK细胞较单纯的CIK细胞在增殖能力、抗肿瘤细胞毒性、效应细胞数量等方面都得到增强。以DC-CIK为代表的过继细胞免疫治疗是其中一种重要的治疗方法。DC-CIK细胞具有增殖速度快、对肿瘤细胞具有高效的杀伤效应、较低的毒副作用等特点,通过调节和提高机体免疫力,同时可进一步清除患者体内微小肿瘤残留,达到抑制和杀灭肿瘤细胞的目的。因此DC-CIK细胞免疫治疗被认为是当前过继细胞免疫治疗的首选。本研究回顾性分析南方医院既往68例TACE术后肝癌患者,根据是否联合细胞免疫治疗对其进行分组、临床数据收集、随访和统计分析,评估我院TACE术后联合DC-CIK细胞免疫治疗原发性肝癌的临床疗效、生活质量、安全性、AFP、肝功能等的变化,为进一步地临床应用DC-CIK细胞免疫治疗提供依据。研究目的探讨树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞(DC-CIK cells)免疫治疗联合TACE术在原发性肝癌中的临床疗效及安全性等。研究方法1.收集2010年4月至2013年4月间在南方医院确诊的中晚期原发性肝癌患者68例,所有患者均行TACE治疗。2.按是否联合DC-CIK细胞免疫治疗分为联合治疗组(TACE+DC-CIK治疗)30例和对照组(仅行TACE术)38例。3.对比分析治疗后两组患者无进展生存期、总生存期、生活质量改善、AFP、肝功能(ALT、AST、Tbil)、DC-CIK细胞治疗安全性等指标。4.本研究采用回顾性分析的研究方法,采用SPSS16.0统计软件进行统计学处理,计数资料比较采用卡方检验,无进展生存期及总生存期计算采用Kaplan-Meier方法。采用Cox比例风险回归模型单因素和多因素分析影响无进展生存期、总生存期的危险因素。P值<0.05为差异有统计学意义。研究结果1.无进展生存期(PFS)：联合治疗组(TACE+DC-CIK组)的30例患者与对照组(TACE组)的38例对比,治疗组的中位无进展生存期为16个月(95%CI,7.9-24.0个月),而对照组则为7个月(95%CI,5.2-8.8个月)。两组的无进展生存期对比有统计学差异(P=0.033)。采用Cox比例风险回归模型行多因素分析发现是否联合DC-CIK细胞免疫治疗(P=0.016). BCLC分期(P=0.006)是影响肝癌患者无进展生存期的独立预后因素。2.总生存期(OS)：至随访结束时,联合治疗组30例患者中共有11例患者死亡,而对照组的38例中则有19例患者死亡,治疗组的中位总生存期为24个月(95%CI,16.3～31.7个月),对照组为13个月(95%CI,3.0-22.9个月)。两组的1年生存率对比为80%Vs75.2%。分析结果显示两组对比无统计学差异(P=0.089)。采用Cox比例风险回归模型行多因素分析发现BCLC分期(P=0.011)是影响总生存期的独立预后因素。3.生活质量评估：联合治疗组30例患者中,治疗后患者生活质量改善者10例(33.3%)、不变者18例,而对照组中则有改善者4例(10.5%)、不变者26例。两组生活质量改善对比有显著差异(P=0.034)。4.AFP评估：TACE治疗组患者,阳性AFP者(AFP≥400μg/L)有18例,经治疗后好转16例(88.8%),恶化2例(11.2%)；而联合治疗组中,阳性AFP者10例,经联合治疗后均全部好转,好转率达100%,但两组对比未见明显统计学差异(P=0.274)。5.肝功能评估：①ALT评估：在治疗组30例患者中,经联合治疗后ALT恶化者仅有3例,占10%；而对照组38例患者中,ALT较前恶化者有20例,达52.6%。两组对比有明显统计学差异(p=0.000)。②AST评估：在治疗组30例患者中,经联合治疗后AST恶化者仅有6例,占20%；而对照组38例患者中,AST较前恶化者有24例,达63.2%。两组对比有明显统计学差异(P=0.000)。③Tbil评估：在治疗组30例患者中,经联合治疗后Tbil恶化者仅有5例,占16.7%；而对照组38例患者中,Tbil较前恶化者有11例,占28.9%。两组对比无明显统计学差异(P=0.236)。但联合治疗组中患者Tbil受损的比例明显小于单纯TACE治疗组(16.7%Vs28.9%)。DC-CIK细胞免疫治疗不加重患者肝功能损伤,且可能改善患者TACE术后肝功能情况。6. DC-CIK细胞治疗的安全性：治疗组中经DC-CIK细胞治疗后仅3例/次(3.19%)出现发烧,且体温均不超过38.5℃,而仅有1例/次(1.06%)出现轻度过敏反应。经过简单的物理降温、抗过敏等对症治疗后,所有患者均恢复正常,且无其他不适反应出现。在DC-CIK治疗后的长期随访中未发现患者出现肝、肾功能损伤及自身免疫疾病等情况发生。结论1.DC-CIK细胞免疫治疗联合TACE术相比单纯TACE术,有助于延长患者的无进展生存期,但在总生存期方面两组无统计学差异；联合治疗能改善中晚期肝癌患者的生存质量。2.DC-CIK细胞免疫治疗联合TACE术有助于降低肝癌患者AFP水平；在肝功能方面,相比单纯TACE术,联合治疗不会加重患者肝功能的损伤,且可能使患者肝功能得到一定的改善。3.DC-CIK细胞免疫治疗安全可靠,可重复应用,无明显毒副作用。