【摘 要】
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目的:探究miR-218-5p对帕金森病（Parkinson’s disease,PD）小鼠黑质区小胶质细胞炎症与多巴胺能神经元丢失的影响及作用机制。方法:对8周雄性C57BL6/J小鼠腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP）构建急性PD小鼠模型,利用实时荧光定量PCR（Quantit
【基金项目】
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国家自然科学基金项目的资助（No.91849121）；
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目的:探究miR-218-5p对帕金森病（Parkinson’s disease,PD）小鼠黑质区小胶质细胞炎症与多巴胺能神经元丢失的影响及作用机制。方法:对8周雄性C57BL6/J小鼠腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP）构建急性PD小鼠模型,利用实时荧光定量PCR（Quantitative real-time PCR,q PCR）法检测miR-218-5p在PD小鼠中的表达变化。采用双侧黑质立体定位注射miR-218-5p agomir的方法构建miR-218-5p过表达小鼠模型,通过免疫荧光染色和蛋白免疫印迹（Western blot,WB）法检测小胶质细胞活化和多巴胺能神经元丢失情况,通过Rotarod转棒实验检测小鼠的运动功能改变。利用转录组高通量测序（High-throughput transcriptome sequencing,RNA-seq）和生物信息学分析进一步探究miR-218-5p对PD小鼠黑质区基因表达的影响和作用途径,通过Target Scan软件预测miR-218-5p的靶基因,并采用双荧光素酶报告基因实验验证。用脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）刺激小鼠小胶质细胞系BV2和小鼠原代小胶质细胞构建小胶质细胞炎症模型,采用q PCR法检测miR-218-5p的表达变化。在小胶质细胞中转染miR-218-5p mimic或靶基因的siRNA以过表达miR-218-5p或敲减靶基因,通过q PCR法和WB法检测miR-218-5p和靶基因对小胶质细胞炎症的影响及相关作用途径。结果:MPTP诱导的急性PD小鼠黑质区miR-218-5p表达较对照组显著下降;miR-218-5p过表达可抑制黑质区小胶质细胞的活化,并缓解PD小鼠黑质区多巴胺能神经元损伤和运动功能障碍。应用基因集富集分析方法对RNA-seq结果进行基因本体论富集分析,结果提示小鼠黑质区miR-218-5p过表达可下调I型干扰素（Interferon,IFN）反应相关途径;差异基因分析和q PCR检测结果显示,I型IFN反应相关基因Irf7,Ddx60和Nlrc5的表达在PD小鼠黑质区显著上调,而过表达miR-218-5p抑制这些基因的表达。通过Target Scan软件预测和双荧光素酶报告基因实验证实Ddx41是miR-218-5p的靶基因。体外实验结果显示,LPS刺激BV2细胞系及原代小胶质细胞使miR-218-5p表达显著下降;过表达miR-218-5p或敲减Ddx41可抑制小胶质细胞炎症模型I型IFN反应及促炎细胞因子的表达。结论:本研究发现miR-218-5p通过靶向Ddx41基因调节I型IFN反应减轻PD小鼠小胶质细胞炎症反应,并缓解多巴胺能神经元丢失,这可能为PD提供了潜在的治疗靶点。
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