论文部分内容阅读
第一部分BAI-1在人膀胱移行上皮细胞癌组织中的表达及与P53、MVD、VEGF的相关性研究目的探讨BAI-1在不同分期膀胱移行上皮细胞癌(bladder transitional cell carcinoma、BTCC)中的表达差异以及BAI-1抑制肿瘤血管内皮增殖的机制。方法取人BTCC石蜡切片标本131例,正常膀胱粘膜组织石蜡切片标本28例。正常膀胱粘膜组织切片标本为对照组,人BTCC组织切片标本为研究组。采用免疫组织化学SP法分别检测BAI-1、VEGF、MVD、P53,进行半定量统计学分析。取临床新鲜BTCC组织标本21例,正常膀胱粘膜组织9例。应用Western blot方法分析BAI-1在BTCC组织及正常膀胱粘膜组织中的表达差异。结果免疫组化统计分析及western blot条带显示正常膀胱粘膜组织中BAI-1表达明显高于BTCC组织,并且与临床分期相关,T1局限期BTCC组织中BAI-1表达远高于T2-4进展期BTCC组织(P<0.05)。同时可以看到BAI-1表达与VEGF且有反相关性(r=-0.661,P=0.000)；BAI-1与MVD表达具有反相关性(r=-0.406,P=0.002)；BAI-1与P53表达具有反相关性(r=-0.675,P=0.000)。结论在BTCC组织中BAI-1含量较正常膀胱粘膜组织明显降低且与BTCC临床分期相关；BAI-1表达与VEGF、MVD成负相关,与突变型P53成负相关性。表明BAI-1可能参与了肿瘤微血管增殖的负调节,而其BAI-1的表达减少也可能与P53的突变相关。第二部分重组质粒载体pReceiver-M61-BAI1转染T24与HUVEC细胞株的效应研究目的构建并鉴定含有BAI-1基因的脂质体质粒载体pReceiver-M61-BAI1,并感染人膀胱癌细胞T24及人脐静脉血管内皮细胞HUVEC,研究其对T24和HUVEC生物学影响。方法将携有BAI-1基因的重组真核表达质粒pReceiver-M61-BAI1转化大肠杆菌DH5a并扩增,抽提纯化质粒并进行酶切鉴定,pReceiver-M61-BAI1体外转染T24和HUVEC细胞,筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染了空质粒的T24和HUVEC细胞为对照,用Q-qPCR及Western blot检测基因mRNA及蛋白表达水平。应用流式细胞仪分别检测BAI1基因转染前后T24细胞和HUVEC细胞凋亡情况的变化,MTT法检测BAI-1基因转染前后T24细胞和HUVEC细胞的增殖情况。结果pReceiver-M61-BAI1的酶切鉴定证实含有目的基因BAI-1；T24和HUVEC细胞株在转染pReceiver-M61-BAI1为研究组,转染pReceiver-M61为对照组,利用Q-PCR技术检测,发现Q-PCR产物经凝胶电泳有明显的阳性条带,而对照组则无明显阳性条带；Western blot检测证实转染pReceiver-M61-BAI1的T24细胞和HUVEC细胞的BAI-1蛋白表达呈阳性；MTT检测发现HUVEC细胞在转染pReceiver-M61-BAI1后12、48、72h的吸光度值明显低于转染pReceiver-M61的对照组以及转染了pReceiver-M61-BAI1的T24细胞组。流式细胞学检测证实转染BAI-1的HUVEC凋亡率明显高于对照组和转染pReceiver-M61-BAI1的T24组。结论BAI-1具有明显的血管内皮细胞抑制作用,而在体外实验中未发现对膀胱癌T24细胞具有直接抑制作用。