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背景与目的大肠癌是胃肠道常见的恶性肿瘤,它致死率高并容易发生转移,我国近年大肠癌的发病率呈逐年上升趋势。目前大肠癌治疗手段仍以手术为主,同时辅以放、化疗的综合治疗。对晚期及转移者,临床治疗效果差。大肠癌病人的死亡主要是肿瘤转移所致。肿瘤的转移是个复杂的过程,基本步骤包括肿瘤细胞侵袭、突破细胞基质,进入血液,经血流到达远处器官,突破血管进入靶器官定居、增殖。研究表明：粘着斑激酶(focal adhesion kinase, FAK)作为胞内重要的信号分子,介导细胞内信号网络系统的交联,在细胞的移动和侵袭中起关键的作用。FAK在原发癌及肝转移癌中均较正常大肠粘膜表达增高。因此,若人为干预FAK的表达,有望为大肠癌的治疗提供一条新的途径。RNA interference(RNAi)具有很强的抑制目的基因作用。较反义寡核苷酸抑制目的基因的效果更强,RNAi被认为是继PCR后又一划时代的基因工程方法。本研究前期体外实验已证FAK沉默能抑制人源结肠癌株SW620的增殖及侵袭能力。为探讨其体内抑瘤作用,本研究拟建立裸鼠盲肠原位移植瘤模型进行研究,因为该模型能很好的模拟人结肠癌的生物学行为,是研究结肠癌的转移、治疗的理想动物模型。研究方法1.用构建好FAK RNAi’慢病毒载体pLL3.7 FAK,在293FT细胞中包装成慢病毒,感染体外培养结肠癌SW620细胞,建立稳定转染细胞株。通过报告基因GFP检测细胞感染效率,运用RT-PCR、Western blot等方法鉴定FAK的表达情况。2.将FAK基因沉默的SW620细胞和阴性对照组SW620及未处理的SW620细胞注射到裸鼠皮下及盲肠,构建肿瘤异体移植模型。3.研究FAK基因沉默与阴性对照组及未处理组SW620细胞在裸鼠体内的成瘤率,瘤体生长情况及转移情况等方面有无差异。结果1.成功包装了靶向FAK的RNAi慢病毒,感染效率>90%,稳定转染细胞株成功建立。RT-PCR及Western blot方法检测发现FAK干扰组与阴性对照组及未处理组对比,FAK的表达明显降低。2.结肠癌皮下移植及盲肠原位移植模型构建成功,为以后结肠癌动物实验研究提供重要参考方法。3. RNAi介导的FAK基因沉默对结肠癌SW620细胞在裸鼠体内的生长并无明显影响,但对原位移植后的远处转移有显著影响,FAK有望成为治疗结肠癌转移的新靶点。结论1.成功构建稳定转染FAK的RNAiSW620细胞。2.成功构建结肠癌皮下移植及盲肠原位移植模型。3.体内实验证实FAK沉默明显抑制大肠癌细胞SW620的侵袭转移能力