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目的:虫草素在炎症中可以通过抑制炎性细胞因子和趋化因子的产生,从而发挥抗炎作用。我们前期的研究发现,虫草素可以在HEK-293T细胞中通过降低p65的转录活性,从而抑制抑制性蛋白（Inhibitor of nuclear factor kappa-B,IκB）磷酸化和阻断IκB激酶γ（IκB Kinaseγ,IKKγ）的泛素化来抑制肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factorα,TNF-α）诱导的核因子-κB（Nuclear factor kappa B,NF-κB）活化,我们还发现虫草素可以通过抑制完全弗氏佐剂（Complete freund’s adjuvant,CFA）诱导的小鼠脚掌炎症模型中的T细胞受体（T cell receptor,TCR）信号传导级联,从而抑制T细胞活化。因此我们设想虫草素抑制小鼠脚掌炎症的机制与其抑制巨噬细胞炎症产生炎性细胞因子和趋化因子有关。本实验通过体内建立小鼠脚掌炎症模型,体外建立巨噬细胞的细胞炎症模型,于致炎之前给予不同剂量的虫草素,旨在通过研究虫草素对巨噬细胞的作用机制探讨虫草素对小鼠脚掌炎症中的抗炎作用。方法:（1）雌性KM小鼠随机分为6组（每组10只）:空白对照组（Control）、生理盐水（Saline）+CFA处理组、地塞米松（Dexamethasone,Dexa）（2 mg/kg）+CFA处理组、虫草素高（H-Cor:20 mg/kg）剂量+CFA处理组、虫草素中（M-Cor:10 mg/kg）剂量+CFA处理组、虫草素低（L-Cor:5 mg/kg）剂量+CFA处理组。利用免疫组化法检测小鼠脚掌炎症组织中细胞因子TNF-α、白介素-6（Interleukin-6,IL-6）、干扰素诱导蛋白10（Interferon-inducible protein-10,IP-10）、γ-干扰素诱导单核因子（Monokine induced by IFN-γ,Mig）和γ-干扰素（Interferon-γ,IFN-γ）的表达;酶联免疫吸附法（ELISA）检测小鼠血清中趋化因子IP-10和Mig的表达。（2）取生长状态良好的小鼠巨噬细胞RAW264.7按一定的密度铺板,培养24h后,随机分为七个组,分别为:正常对照组、脂多糖（Lippolysaccharide,LPS）处理组、Dexa（2μg/m L）+LPS处理组,虫草素（25μM、50μM、100μM、200μM）+LPS处理组。利用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）技术检测促炎细胞因子TNF-α和IL-6 m RNA的表达水平;ELISA法检测小鼠巨噬细胞RAW264.7上清液中促炎细胞因子TNF-α和IL-6的表达水平;蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测小鼠巨噬细胞RAW264.7中IL-1受体相关激酶-1（Interleukin-1 receptor associated kinas,IRAK-1）和转化生长因子激酶1（TGF-beta-activated kinase 1,TAK1）磷酸化蛋白的表达水平。（3）取生长状态良好的小鼠巨噬细胞RAW264.7按一定的密度铺板,培养24h后,小鼠巨噬细胞RAW264.7随机分为正常对照组、γ-干扰素（IFN-γ）处理组、虫草素（25μg/m L、50μg/m L、100μg/m L）+IFN-γ处理组。利用Western Blot检测小鼠巨噬细胞RAW264.7中信号传导及转录激活因子-1（Signal transducers and activators of transcription-1,STAT1）磷酸化蛋白的表达水平;ELISA法检测小鼠巨噬细胞RAW264.7上清液中趋化因子IP-10和Mig的表达水平。结果:1.免疫组化法检测发现,在Saline+CFA处理组的小鼠脚掌炎症组织中,促炎细胞因子TNF-α和IL-6的表达量明显增加,虫草素预处理的小鼠脚掌炎症组织中促炎细胞因子TNF-α和IL-6的表达量明显减少。2.免疫组化法检测发现,在Saline+CFA处理组的小鼠脚掌炎症组织中,趋化因子IP-10和Mig的表达量明显增加,虫草素预处理的小鼠脚掌炎症组织中趋化因子IP-10和Mig的表达量明显减少。同时,通过ELISA法检测发现,在小鼠血清中Saline+CFA处理组趋化因子IP-10和Mig表达量明显上升,虫草素预处理组趋化因子IP-10和Mig表达量均有所下降。3.免疫组化法检测发现,在Saline+CFA处理组的小鼠脚掌炎症组织中,细胞因子IFN-γ的表达量明显增加,虫草素预处理的小鼠脚掌炎症组织中细胞因子IFN-γ的表达量明显减少。4.RT-qPCR技术检测发现,在只受到LPS刺激的巨噬细胞中促炎细胞因子TNF-α和IL-6 m RNA表达量明显上升,虫草素预处理组促炎细胞因子TNF-α和IL-6 m RNA表达量均有所下降;同时,ELISA法检测发现巨噬细胞的上清液中LPS处理组促炎细胞因子TNF-α和IL-6表达量明显上升,虫草素预处理组促炎细胞因子TNF-α和IL-6的表达量呈浓度依赖性降低。5.Western Blot检测信号通路蛋白发现,在LPS处理组中,IRAK-1和TAK1的磷酸化蛋白表达明显上升,虫草素预处理的巨噬细胞中IRAK-1和TAK1的磷酸化蛋白的表达量逐渐降低。6.Western Blot检测发现IFN-γ处理组中STAT1磷酸化蛋白表达量明显上升,虫草素预处理的巨噬细胞中STAT1的磷酸化蛋白表达量逐渐下降。7.ELISA法检测发现巨噬细胞的上清液中IFN-γ处理组趋化因子IP-10和Mig表达量明显上升,虫草素预处理组趋化因子IP-10和Mig的表达量呈浓度依赖性降低。结论:（1）虫草素可以抑制CFA诱导的小鼠脚掌组织中促炎细胞因子TNF-α、IL-6、IFN-γ以及趋化因子IP-10、Mig的表达。（2）虫草素可以抑制LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7的活化,阻止IRAK-1蛋白的磷酸化,从而抑制介导的TAK1蛋白的磷酸化,抑制TNF-α、IL-6表达,从而减轻炎症反应。（3）虫草素可以抑制IFN-γ诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7的活化,抑制STAT1蛋白磷酸化,下调STAT1效应基因IP-10、Mig表达,减少免疫细胞在炎症部位的浸润,从而减轻炎症反应。