论文部分内容阅读
单纯疱疹病毒感染是人类比较常见的感染性疾病，HSV-2主要引起生殖器感染，它是引发生殖器疱疹和溃疡最主要的原因，是一个世界性的公共卫生问题。目前用于生殖器疱疹治疗的药物主要为核苷类抗病毒药物，虽然可以取得较好的治疗效果，但是无法清除病毒，因此不能彻底治愈感染，无法有效控制HSV-2的复发。
近来，科学家们做了大量的努力进行HSV疫苗的研制，以期能够控制HSV的感染。一些候选疫苗也已经在各类模型中进行了实验。专家们认为研制有效的HSV疫苗，激发机体抗HSV感染免疫作用，调动体内细胞免疫和体液免疫功能，以清除HSV感染，可能是目前预防和治疗HSV的理想方法。
本研究中我们构建了一个含卡那霉素抗性基因的真核表达质粒载体，然后以此为基础构建含HSV-2糖蛋白D全基因序列的HSV-2DNA疫苗。同时构建含CpG基序的DNA疫苗免疫佐剂，并联合HSV-2DNA疫苗免疫小鼠，观察CpG佐剂对HSV-2DNA疫苗的免疫促进作用。
方法：
通过PCR扩增和连接重组从质粒pET-28a(+)和质粒pcDNA3获得一个新的含卡那霉素抗性真核表达质粒载体。通过PCR从重组真核表达质粒pcDNA3-gD上扩增出HSV-2糖蛋白D全基因序列，克隆入新构建的质粒载体pcDNAkan获得HSV-2DNA疫苗pgD。设计并合成一段含CpG基序的DNA片断，克隆入质粒载体pcDNAkan，获得DNA疫苗免疫佐剂pCpG，同时合成一段CpGODN，分别以pCpG和CpGODN为佐剂联合DNA疫苗pgD免疫小鼠，观察和比较它们对小鼠的免疫效果及保护作用。
结果：
小鼠经免疫接种三次后，血清ELISA检测IgG结果显示pgD+pCpG组最高，略高于pgD组和pgD+CpGODN组，与空质粒对照组相比具有显著性差异(P＜0.01)。流式细胞仪检测血液CD4+T淋巴细胞亚群结果显示pgD+pCpG组最高，与其它各组相比较均有显著性差异(P＜0.05)。
结论：
pCpG能促进pgD诱导更为强烈的细胞免疫反应，为获得一种稳定、有效的HSV-2DNA疫苗及其免疫佐剂奠定了基础。