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禽流感（AI）和鸡痘是禽类感染疾病中比较严重的两种疾病,给养禽业造成了严重的经济损失。AI是由A型流感病毒（AIV）引起的一种禽类疾病,分为高致病性禽流感（HPAI）和低致病性禽流感（MPAI）,近年来在我国部分地区广泛流行,对我国的养禽业危害严重。当前我国对禽流感的控制主要依赖常规疫苗的免疫接种,但常规疫苗的使用存在一些难以克服的缺陷,如影响疫情监测、生产成本高等。因此,我们构建了单表达H5N1亚型AIV血凝素（HA）基因的重组病毒、双表达H5N1亚型AIV的HA和神经氨酸酶（NA）基因的重组病毒及双表达H5N1和H9N2亚型AIV的血凝素基因（HA）的重组病毒。鸡痘病毒（FPV）基因组庞大,有严格的宿主范围,许多学者利用FPV不同的非必需区构建载体表达外源基因,在SPF鸡上都能得到较好的实验结果,但在很多种情况下在有母源抗体的商品鸡上实验效果不佳。为比较从两种不同非必需区的FPV载体得到的重组病毒在抵抗母源抗体干扰能力方面的差异,同时比较从不同毒力的鸡痘疫苗为亲本病毒得到的重组病毒在抵抗母源抗体干扰能力方面的差异,本研究分别利用含不同非必需区的两种FPV载体p11S和p12LS（复制非必需区分别为FPV7S和FPV1-2）以及282E4和大空斑两种亲本FPV构建重组病毒,在SPF鸡和商品鸡进行免疫保护试验,旨在筛选出在母源抗体阳性商品鸡群仍能提供有效保护的重组鸡痘病毒H5和H9亚型禽流感疫苗。 1.表达H5亚型AIV HA基因的重组FPV的获得及其遗传稳定性 以质粒pTH5A为模板,用PCR扩增出约为1.7kb的H5A基因。将其插入载体p11S和p12LS,获得转移载体p11SH5A和p12LSH5A。用GeneJammerTM转染试剂将转移载体分别与wt-FPVLP或wt-FPV282E4共转染鸡胚成纤维细胞（CEF）,蓝斑筛选纯化得3个重组病毒rFPVLy-11 SH5A、rFPVLp-12LSH5A和rFPV282E4-12LSH5A。以间接免疫荧光（IFA）证实,重组病毒能正确表达H5A蛋白。rFPVs在CEF上连续传10代,经蓝斑检测和PCR检测,表明所得的rFPVs均具有良好的遗传稳定性。