背景:糖尿病肾病(Diabetic Kidney Disease,DKD)是糖尿病致死率很高的一种微血管并发症,也是慢性肾脏疾病(Chronic Kidney Disease,CKD)的主要原因,疾病过程中所涉及的发病机制很复杂,随着近年来研究的进展,免疫炎症反应发挥的作用日益凸显。目前临床上通常以尿蛋白的增高作为DKD诊断的首要指标,但这一指标敏感性低且具有滞后性,考虑到DKD患者在疾病后期病情逐渐加重进展为终末期肾病(End-stage renal disease,ESRD)的趋势难以逆转,DKD的早期诊断尤为重要,一直都是研究的热点。外泌体(exosomes)是一种可以被几乎所有类型细胞分泌的胞外小囊泡,携带着丰富的来源细胞的蛋白质、脂质、核酸等信息分子,对多种疾病具有诊断和治疗意义。肾脏的各种类型细胞均可释放exosomes,通过对尿液exosomes所携带的生物学信息可以了解到肾脏的生理病理改变,有望识别早期DKD。白细胞介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)是重要的促炎细胞因子,当细胞识别到危险信号时通过多种途径被大量激活,产生病理效应,有研究证明其在糖尿病肾病进展过程中表达出现异常。T细胞免疫球蛋白与黏蛋白结构域分子1(T cell immunoglobulin and mucin domain-1,TIM-1)主要表达在 Th2 细胞上,可以刺激Th2细胞增殖分化并分泌多种炎症因子发挥促炎作用,肾组织受损时TIM-1可以在尿液中检测到。包括DKD在内的各种CKD在进展过程中都会发生肾小管间质纤维化,多项研究证明在此过程中重要的细胞黏附分子E-钙黏蛋白(Epithelial-cadherin,E-cadherin)会发生下调和丢失。在本研究中我们检测尿液exosomes中这些因子的表达水平在DKD疾病进展过程中的变化,以探究其与DKD之间的关系。目的:检测健康成人及糖尿病患者尿液外泌体IL-1β、TIM-1、E-cadherin的表达水平,以探究其与糖尿病肾病的相关性。方法:本研究收集了糖尿病患者97例,采用晨尿检测尿白蛋白肌酐比(urinary albumin/creatinine ratio,UACR),根据检测的结果,将病例组分为糖尿病无肾病组(DM,46例,UACR<30mg/g),微量白蛋白尿组(DN1,32例,30mg/g≤UACR<300mg/g),大量白蛋白尿组(DN2,19 例,UACR≥300mg/g)。同时收集健康成人31例作为对照组。收集所有入选对象的一般资料和生化指标。采用超滤离心法和特异性的单克隆抗体法提取尿液exosomes,使用透射电镜及western blot法鉴定所提取的exosomes。应用ELISA法检测尿液外泌体IL-1β、TIM-1、E-cadherin的表达水平。应用SPSS 21.0对本实验所得的数据进行统计学分析,若计算p<0.05即提示差异具有统计学意义。结果:1.四组受试者的年龄、性别、体重指数、收缩压、舒张压、肌酐、尿素氮、胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇无显著性差异。与对照组相比较,DM、DN1、DN2组UACR水平显著升高,且三组之间的差异具有统计学意义(P<0.05)。2.尿液exosomes在电镜下观察呈双凹圆盘状,具有明显的双层膜样结构,western blot法鉴定提示exososmes标记蛋白TSG101和CD63高表达。3.western blot结果提示IL-1β、E-cadherin在大量蛋白尿组表达水平明显升高。ELISA法结果示尿外泌体IL-1β的水平在健康对照组显著低于其他DM、DN1和DN2组,而且随尿蛋白的增高而表达升高,各组之间差异具有统计学意义(p<0.05)。DM,DN1和DN2组尿外泌体E-cadherin的活性显著低于对照组(p<0.05),但DM、DN1和DN2组之间无显著差异(p>0.05)。四组尿外泌体TIM-1水平差异无统计学意义(p>0.05)。尿液外泌体IL-1β与尿白蛋白肌酐比、糖化血红蛋白、低密度脂蛋白胆固醇、胆固醇呈正相关。以尿外泌体IL-1β为应变量进行逐步多元线性回归分析,尿白蛋白肌酐比和糖化血红蛋白是尿外泌体IL-1β的独立危险因素(p<0.05)。结论:1.尿外泌体IL-1β的表达水平随DKD病情的加重而升高,提示尿液外泌体IL-1β的表达水平对DKD早期诊断具有一定意义;尿液外泌体IL-1β的表达水平与 UACR、HbA1c、LDL-C、CH 呈正相关;UACR、HbA1c 是尿外泌体 IL-1β的独立危险因素。2.T2DM患者尿液外泌体E-cadherin的表达水平与健康成人相比明显降低,但与DKD的严重程度无关,需要进一步扩大样本量进行研究3.尿液外泌体TIM-1的表达水平在健康成人及T2DM患者之间无明显差异,其与DKD发病之间的相关性还有待研究。